[发明专利]2-酮-L-古龙酸的发酵生产方法

权利要求书

1.一种2-酮-L-古龙酸的发酵生产方法，其特征在于，以山梨醇为原料，将氧化葡萄糖酸杆菌、生酮古龙酸杆菌及其伴生菌混合发酵培养，制得2-酮-L-古龙酸。

2.根据权利要求1所述的发酵生产方法，其特征在于，所述伴生菌为芽孢杆菌。

3.根据权利要求1或2所述的发酵生产方法，其特征在于，所述伴生菌为巨大芽孢杆菌。

4.根据权利要求1至3任一项所述的发酵生产方法，其特征在于，包括种子培养和发酵培养。

5.根据权利要求4所述的发酵生产方法，其特征在于，所述种子培养的培养基包括第一种子培养基和第二种子培养基；

所述第一种子培养基包括：玉米浆3g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨10g/L，尿素1g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，碳酸钙1g/L，山梨醇20g/L，pH调至6.7-7.2，121℃，灭菌20min，制成第一种子培养基；固体培养基另加20g/L的琼脂粉；

所述第二种子培养基包括：玉米浆3g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨10g/L，尿素1g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，碳酸钙1g/L，山梨糖20g/L，pH调至6.7-7.2，121℃，灭菌20min，制成第二种子培养基；固体培养基另加20g/L的琼脂粉。

6.根据权利要求5所述的发酵生产方法，其特征在于，所述种子培养包括如下步骤：

步骤1：将活化好的氧化葡萄糖酸杆菌接种于所述第一种子培养基中，经第一培养后，转接所述第一种子培养基，扩大培养，制成第一种子液；

步骤2：将活化好的生酮古龙酸杆菌及其伴生菌接种于所述第一种子培养基中，经第二培养后，转接所述第二种子培养基，扩大培养，制成第二种子液。

7.根据权利要求6所述的发酵生产方法，其特征在于，步骤1中所述第一培养为于30℃，200r/min培养24小时；

步骤1中所述扩大培养为于30℃，200r/min培养24小时；

步骤2中所述第二培养为于30℃，200r/min培养20小时；

步骤2中所述扩大培养为于30℃，200r/min培养12小时。

8.根据权利要求6或7所述的发酵生产方法，其特征在于，所述发酵培养为将所述第一种子液和第二种子液接种到发酵培养基中，发酵培养，制得2-酮-L-古龙酸。

9.根据权利要求8所述的发酵生产方法，其特征在于，所述发酵培养基包括玉米浆10g/L，尿素12g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，碳酸钙1g/L，山梨醇80g/L，加消泡剂1ml，pH调至6.7-7.0，121℃，灭菌20min，制成发酵培养基。

10.根据权利要求6至9任一项所述的发酵生产方法，其特征在于，所述第一种子液中活菌数为3.60×10¹⁰～3.6×10¹¹；以所述发酵培养基的质量为基准，所述第一种子液的接种量为10％；

所述第二种子液中活菌数为6.20×10¹⁰～6.2×10¹¹；以所述发酵培养基的质量为基准，所述第二种子液的接种量为5％；

所述发酵培养为于30℃，500r/min，pH控制7.0，用2.5mol硫酸和5mol氢氧化钠调节pH，通气1.5vvm。