[发明专利]一种分子量11400D和19490D高纯度漆籽多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子量11400D和19490D高纯度漆籽多糖的制备方法，属于天然药物、食品领域。

背景技术

漆树（Rhus verniciflua stokes），为漆树科（Anacardiaceae）漆树属（(Toxicodendron）的一种落叶乔木。 漆树是我国重要的特用经济林，生漆是天然树脂涂料，素有“涂料之王”的美誉。主要分布在北纬25～42°，东经95～125°之间的山区，其中秦巴山地和云贵高原为漆树分布集中地区。生漆是漆树分泌物，为天然树脂涂料，素有“涂料之王”的美誉。

漆籽为漆树的果实，其中果皮为蜡质层，可以提取漆蜡，内核为种子，可榨取漆油，在我国现有的漆树资源中，每年的漆籽产量约为200多万吨。目前对漆籽的研究主要集中在漆脂的提取及精制加工等方面，董艳鹤等^[2-3]研究了热回流提取漆蜡的单因素和正交试验，优化漆蜡提取的最佳工艺，并采用GC-MS色谱分析了陕西野漆树和江西引种日本野漆树中漆蜡脂肪酸的化学成分，两个产地的漆蜡主要脂肪酸组成为棕桐酸、油酸和硬脂酸等。并进一步研究了漆蜡的脱色精制工艺，采用该方法制得的漆蜡的白度达85.2。漆树籽粕是漆籽压榨完后主要的剩余物，目前对它的开发利用尚属空白。为了扩大漆树产业的规模化，延伸漆树资源的产业链，因此开展漆树籽粕中多糖的提取和分离研究，对于漆树资源的开发利用具有指导意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分子量11400D和19490D高纯度漆籽多糖的制备方法，通过对漆树籽粕多糖的分离纯化，得到纯度为95%以上的漆树籽粕多糖成分。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个目的在于提供一种分子量11400D和19490D高纯度漆籽多糖的制备方法，所述的分子量11400D和19490D多糖含量为95%，所述的分子量11400D多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖组成，所述的分子量19490D多糖由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖组成。

所述的一种分子量11400D和19490D高纯度漆籽多糖的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步

将漆树籽粕干燥、粉碎，按质量比1:5~1:30(g:mL)，加入石油醚或正己烷，常温或加热回流提取2~3次，每次2h~10h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发回收溶剂，滤渣经过减压干燥，得到脱脂籽粕；

第二步

将脱脂籽粕，按质量比1:5~1:30(g:mL)，加入蒸馏水，加热回流提取2~3次，温度60～90℃，提取时间1h~5h，过滤，滤液合并，于50～70℃下减压浓缩，浓缩液按体积比1～10:30（v/v）的比例加入无水乙醇，进行醇沉，离心得到沉淀，沉淀进行干燥，即为漆树籽粕粗多糖；

第三步

将漆树籽粕粗多糖，按质量比1:3~1:5(g:mL)，加入蒸馏水，配制成3mg/mL的漆树籽粕粗多糖水溶液，按体积比1:5~1:10(v/v)，加入Sevag试剂萃取3～5次，分离，取水层，合并，经真空干燥或冷冻干燥，得到漆树籽粕多糖提取物；

第四步

将上述得到的漆树籽粕多糖提取物，用蒸馏水配制成浓度为50mg/mL的多糖水溶液，采用DEAE-纤维素-52层析柱进行分离，依次采用2倍柱体积（BV）的蒸馏水、1BV的0.1mol/L NaCl、1BV的0.3mol/L NaCl、1BV的0.5mol/L NaCl和1BV的0.7mol/L NaCl溶液进行阶梯式洗脱，以10mL为一管进行分管收集；收集液进行多糖含量检测，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液；将合并的各部位的洗脱液，采用分子量为3000道尔顿的透析袋进行透析除盐24h～48h，浓缩透析液，经真空干燥或冷冻干燥，得到漆树籽粕多糖组分JP2和JP3；

第五步

将上述得到的漆树籽粕多糖组分JP2和JP3，用蒸馏水分别配制成浓度为5～10mg/mL的多糖水溶液，再分别采用葡聚糖凝胶柱层析进行分离，采用2倍柱体积（BV）的蒸馏水进行洗脱，以10mL为一管进行分管收集；收集液进行多糖含量检测，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线收集各部位多糖洗脱液，经真空干燥或冷冻干燥，得到漆树籽粕多糖组分JP2-1和JP3-1；

第六步

将漆树籽粕多糖组分JP2-1和JP3-1进行HPLC分析，多糖组分JP2-1为分子量11400D的漆籽多糖，多糖组分JP3-1为分子量19490D的漆籽多糖。