[发明专利]一种用于疫苗的非载体佐剂、其制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种用于疫苗的非载体佐剂、其制备方法及应用，所述的非载体佐剂为表面经免疫调节分子修饰的银纳米棒。本发明所述非载体佐剂可有效增强HIV蛋白疫苗的抗体IgG与IgG3和细胞CD107a，IL‑2，IL‑4与TNF‑α免疫反应水平；且所述非载体佐剂的细胞毒性极低，几乎不被细胞摄取，不影响细胞的正常生长；本发明所述非载体佐剂还具有更好的生物相容性，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种用于疫苗的非载体佐剂、其制备方法及应用。

背景技术

疫苗是预防和控制传染性疾病发生及发展的重要手段。免疫佐剂(又称非特异性免疫增生剂)则是疫苗中不可或缺的组成成分，能够有效地促进疫苗诱导的特异性免疫反应。随着疫苗研究的飞速发展，新型的基因工程疫苗正被广泛用于疫苗的研制开发。这种疫苗具有纯度高、特异性强等优点，但是由于其分子小，免疫原性相对较差，迫切需要结合有效的免疫佐剂，以提高疫苗的免疫效力。过去的数十年来，人们在研究中发现和研制了各种新型的免疫佐剂，然而潜在的安全性及稳定性等因素大大制约了免疫佐剂的推广使用。

纳米银具有抗菌、除臭及吸收部分紫外线的功能，可应用于医药行业和化妆品行业，在化纤中加入少量的纳米银，可以改变化纤品的某些性能，并赋予很强的杀菌能力。人们均将纳米材料作为载体，高效负载疫苗抗原，增强抗原进入细胞的能力，最终诱导更强的免疫反应。但这样的策略通常也会因为纳米疫苗载体的过多进入细胞，而造成过强的细胞毒性，不利于纳米佐剂的进一步临床应用。

CN 102068698 A公开了一种纳米疫苗及其制备方法，采用新的甘露糖基化的阳离子脂质体复合物，可以作为疫苗载体及应用于疫苗，这种新的脂质体复合物在阳离子脂中掺入中性磷脂和甘露糖。该发明作为一种高效无副作用的新型疫苗载体和佐剂，显著增强疫苗的免疫效果。CN 101972477 A公开了一种磷酸锌疫苗佐剂及其应用，所述磷酸锌作为疫苗佐剂与疫苗联合应用，能够有效增强疫苗的体液免疫应答，其免疫增强效果优于铝佐剂和氢氧化锌佐剂。但上述的纳米疫苗和佐剂都能被细胞摄取，影响细胞的正常代谢。

许立耕等研究了金纳米棒经CTAB、PDDAC和PEI修饰后，作为DNA疫苗佐剂，在治疗HIV中的作用(参见Ligeng Xu,et al.,Surface-Engineered Gold Nanorods:PromisingDNA Vaccine Adjuvant for HIV-1Treatment.Nano Letters,2012,12(4):2003-2012)，尽管其首次公开了将金纳米棒作为载体佐剂用于增强HIV免疫反应，然而，其存在以下缺陷：金纳米棒佐剂，对细胞的毒性更强，且刺激免疫反应的能力相对较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于疫苗的非载体佐剂、其制备方法及应用，所述非载体佐剂增强免疫反应的同时，不会进入细胞，且毒性极低。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种用于疫苗的非载体佐剂，所述的非载体佐剂为表面经免疫调节分子修饰的银纳米棒。

目前来看，载体佐剂通常要作为抗体的载体，伴随抗体一起进入细胞内，会对细胞产生毒性，然而本发明所述的非载体佐剂于载体佐剂有着本质的不同，其不与抗体结合，几乎不会被细胞摄取，因而对细胞只有极低的细胞毒性，不会影响细胞的正常代谢和正常生长，这类具有良好生物相容性的纳米佐剂可有效增强蛋白疫苗所引发的免疫反应，包括抗体反应和T细胞反应等。

本发明所采用的银纳米棒不同于现有技术中的金纳米棒，其不同主要体现在：表面修饰的免疫调节分子和组成成分不同，银纳米棒和金纳米棒的尺寸也存在差异，这就导致了细胞对银纳米棒和金纳米棒的摄取程度不同和对细胞的免疫效果不同；其相对于金纳米棒，具有以下优势：银纳米棒作为非载体佐剂，能显著增强免疫反应，几乎不被细胞吸收，对细胞的毒性相较于金纳米棒低得多。。