[发明专利]一种基于DNA质量鉴定牛奶中脂肪和蛋白质含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于DNA质量鉴定牛奶中脂肪和蛋白质含量的方法，该方法采用牛奶中牛基因组DNA的质量来鉴定牛奶中脂肪和蛋白质的含量，在一定范围内，建立牛奶中蛋白质的含量与牛奶中牛基因组DNA的含量的线性回归方程或建立牛奶中脂肪的含量与牛奶中DNA的含量的线性回归方程来判定牛奶中脂肪或蛋白质含量；本发明首次建立了牛奶中牛基因组DNA质量与牛奶中乳蛋白、乳脂肪含量的关联性，为牛奶中乳蛋白、乳脂肪营养品质的鉴别提供一种新方法，该方法操作简单、费用低、应用前景广阔，对于牛奶的营养品质检测具有重要的意义。

技术领域

本发明属于食品科学领域，具体主要依托牛奶中牛基因组DNA质量来鉴定生鲜牛奶中脂肪和蛋白质含量变化情况。该方法拟建立冷藏(1～5℃)条件下牛奶中DNA含量质量与牛奶主要营养品质(乳脂肪、乳蛋白)的相关关系，有利于为乳品加工企业和广大消费者提供高品质原料奶。

背景技术

生鲜牛奶中蛋白质和脂肪含量是评价牛奶营养品质最为重要的两个指标，同时也常被作为原料奶收购的标准。两个指标的检测方法多采用物理化学方法。

蛋白质含量测定常用的有4种经典方法：凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法(Lowry法)、紫外吸收法和考马斯亮蓝法。凯氏定氮法的缺点是耗时长，灵敏度低，样品中的含氮化合物会影响蛋白含量的测定；要想准确测定出蛋白含量，可以先测定出总含氮量，再用三氯乙酸将样品溶液中的蛋白沉淀除去，然后测定溶液的非蛋白含氮量，最后从总含氮量中扣除非蛋白含氮量就可以比较准确地测定出样品的真正蛋白含量。双缩脲法测定范围为1～10mg蛋白质，干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等；此法的缺点是灵敏度差，常用于需要快速、但并不需要十分精确的蛋白质测定。Folin-酚试剂法是由Lowry在双缩脲方法的基础上发展的，比双缩脲法灵敏，可检测的最低蛋白质量达5μg；缺点是费时较长，要精确控制操作时间，各项操作必须精确控制时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多；对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应，而且对Lowry反应的影响更大。紫外吸收法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差，专一性差，干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物质，会出现较大的干扰；虽可以校正，但还是存在一定的误差；在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。考马斯亮蓝法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法，因而正在得到广泛的应用；其特点是灵敏度高，最低蛋白质检测量可达1μg；测定快速、简便，只需加一种试剂，完成一个样品的测定一般只需要5分钟左右；干扰物质少，如干扰Lowry法的大部分因素均不干扰此测定法。

脂肪测定的方法较多，有索氏抽提法、酸水解法、伊尼霍夫氏碱法、哥特里-罗紫法、盖勃氏法、巴布科克氏法等。索氏抽提法和酸水解法多用于食品中脂肪的检测，而酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量。哥特里-罗紫法、盖勃氏法、巴布科克氏法和伊尼霍夫氏碱法多用于乳与乳制品脂肪的传统检测。乳制品中脂肪酸含量和种类的定量检测使用气相色谱法，但样品前处理过程复杂；首先都必须对脂肪进行皂化和甲酯化，再利用气相色谱法测定其中脂肪酸的含量，此种方法耗时长、耗材多；高效液相色谱法不仅能检测脂肪酸的含量，同时也可以测出各种脂肪酸在其中的位置分布情况，该方法准确性和重现性好，但样品准备过程复杂，耗时长。韩瑞丽等利用高效液相色谱-蒸发光检测器与气相色谱-质谱连用法测定牛奶甘油三酯sn-2位脂肪酸组成，该法省去了传统测定中费时费力的薄层色谱分离步骤，精密度高、结果可靠。林观平等使用气相色谱-质谱联用仪定性定量分析了湛江湖光牛奶脂肪酸组成和含量，该方法高效易行，准确可靠，节省时间，适合大标量样品的检测。王丽杰等利用近红外漫反射光谱技术和偏最小二乘方回归法检测和分析了牛奶中蛋白质含量，该方法具有快速、成本低和能同时无损测量多种成分等优点，但是需要大量的牛奶来建立模型，且需要有牛奶中乳蛋白含量的数值。

发明内容