[发明专利]基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法

权利要求书

1.基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于：取黄花倒睡莲植株为外植体，经过表面消毒、初代培养、一体化培养、炼苗、移栽，最终获得黄花倒睡莲组培苗；

所述方法具体包括以下步骤：

(1)表面消毒：取生长健壮、无病虫害的野生黄花倒睡莲植株为外植体，去除叶片后用软毛刷轻刷表皮，将其进行表面消毒处理a后，切成含有2-4个多节间的茎段备用；若选择生长健壮的黄花倒睡莲组培苗用于繁殖，则采用消毒处理b后直接切取后进行初代培养；

(2)初代培养-丛生芽诱导与增殖：将已经过消毒处理的多节间茎段接种入培养基A中，多节间茎段横放平铺于培养基中，10-15天后进行一体化培养；培养基A配方为：MS+ 6BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + KT 0.5 mg/L + Suc 30 g/L +琼脂粉8 g/L，PH值为5.8；

(3)一体化培养：将经初代诱导的多节间丛生芽切取成1.5-2.0 cm长的单芽横放入培养基B中，每瓶接种30棵，光照强度为1500-3000 lx，10天后开始生根，20天长至6-8 cm高度后，准备移栽；

(4)炼苗：20天后，将瓶苗从培养室取出放置常规室内3-5天，第6天将瓶盖打开后继续放置2天，期间每天要补充10-15 ml无菌水至瓶内，第8天后将组培苗轻轻夹出，洗净根部培养基，以备移栽；

(5)移栽：将洗净的黄花倒睡莲组培苗用500 ppm多菌灵溶液浸泡30 min后，取出，用稀黄土将其根部包裹成鸡蛋大小后，移栽，放入基质为泥炭土、黄泥土、珍珠岩按一定配比组合的栽培基质中种植；

(6)田间栽培管理：将幼苗移栽田间，环境温度 24-26℃，喷雾保湿，保持空气湿度 85-95%，覆盖遮阴率 70%遮阳网，每周喷洒1 次广谱杀菌剂，每月浇1次两倍 MS 大量溶液，一年后植株的平均根粗达0.5-0.8 cm；

培养基B配方为：1/4 MS+ IBA 0.2 mg/L + NAA 0.5 mg/L + AC 1 g/L + Suc 20 g/L +琼脂粉9 g/L，PH值为5.9。

2.根据权利要求1所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于：步骤（1）中表面消毒处理a为在含体积浓度为0.1-0.2%洗洁精的水中浸泡30 min，流动的水冲洗1-2 h，置于超净工作台上用70 wt.%酒精消毒20-30 s，无菌水冲洗3-5次，再用0.1 wt.%升汞消毒10-20 min，无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。

3.根据权利要求1所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于：步骤（1）中消毒处理b为70 wt.%酒精消毒5 s，无菌水冲洗3-5次，0. 1 wt.%升汞消毒3 min，无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。

4.根据权利要求1所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于：所述的移栽基质配比是：泥炭土︰黄泥土︰珍珠岩的重量比为 3︰2︰1。

5.根据权利要求1所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于：所述广谱杀菌剂为50% 多菌灵与70% 甲基托布津交替使用。