[发明专利]一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法与质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学成分分离纯化技术，具体属于杜仲叶中总黄酮的制备工艺及其质量检测方法。

背景技术

杜仲的别名丝棉树、丝棉皮、玉丝皮。在植物分类学上属杜仲科杜仲属，其皮叶同为中药品种，收载于中国药典2010年版一部，具有补肝肾、强筋骨的作用。由于杜仲皮一般需生长多年，方可采收，周期长，资源相对紧缺。而杜仲叶的资源相对丰富、易得，近代研究证实了杜仲叶与杜仲皮有相同的有效成分和药理作用。杜仲叶中含有多种黄酮类物质，国内有关制药企业常把杜仲叶制备成杜仲浸膏，因此，需要有一种能有效检测杜仲浸膏质量的检测方法。

发明内容

本发明的目的是针对上面所述缺陷，提供一种工艺简单、能耗低且提取物中总黄酮含量高的杜仲叶总黄酮提取物的制备方法。

本发明的另一目的是提供一种杜仲叶总黄酮提取物的质量检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：以杜仲叶为原料，粉碎成粗粉，用8~20倍40%~95%的乙醇超声提取，提取1~3次，每次30min~60min；收集提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；离心，得上清液；选用HPD-100、HPD-400、HPD600或D101大孔树脂，上样，上样吸附0.5~2.0小时，依次用1~3倍水洗脱除杂，流速为每小时1~3倍水；再以2~4倍30%~95%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时1~4倍；收集所得洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲总黄酮提取物。

一种杜仲叶总黄酮提取物的质量检测方法，其特征在于，采用HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：

a.色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20~50:80~50的甲醇-0.1~1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：0.8ml/min~1.0ml/min；柱温：25℃~35℃；理论塔板数均不低于2000；

b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品和槲皮素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成芦丁和槲皮素的混合对照溶液，摇匀，即得；

c.供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物适量，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；

d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液5~15ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本发明具有以下优点：从资源丰富的杜仲叶中提取黄酮类物质，在整个制备过程中，工艺简单，能耗低，所用溶剂为乙醇和水，可回收利用，无污染，具有较好的环境效益；得到提取物中总黄酮含量高，具有较好的经济效益和社会效益。检测相对方便，质量易控制。

具体实施方式：

实施例1。

将杜仲叶粉碎成粗粉，置于超声提取罐中用10倍量的50%乙醇超声提取，提取1次，每次提取30min；合并浓缩液，5000r/min离心10min，得上清液；上清液通过HPD600，吸附0.5小时，用1倍水，流速为每小时1倍水洗脱除杂；再以2倍50%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时一倍体积，收集洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲叶总黄酮提取物。

HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：

a.色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20:80的甲醇-0.1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；

b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品20.5mg和槲皮素0.54mg，精密称定，置于100ml量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成1ml含0.205mg芦丁和5.4ug槲皮素的溶液，摇匀，即得；

c.供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物0.5241g，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；

d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液5ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

测得杜仲提取物含槲皮素0.18mg/g和2.54mg/g芦丁。

实施例2。