[发明专利]食品中黄曲霉毒素的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黄曲霉毒素的测定方法，具体地说，是涉及食品中黄曲霉毒素的测定方法，属于医药检测技术领域。

背景技术

黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉(a.parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。

它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。

目前国标GB/T 18979-2003中的方法：

1、提取：

(1)大米、玉米、小麦、花生及其制品：准确称取经过磨细(粒度小于2mm)的试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇-水(7+3)至125.0mL，以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL滤液并加入30.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。

(2)植物油脂：准确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及加入甲醇-水(7+3)至125.0mL，以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL滤液并加入30.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。

(3)酱油：准确称取试样50.0g于250.0mL具塞锥形瓶中，加入2.5g氯化钠及加入甲醇-水(8+2)至100.0mL，以均质器高速搅拌提取1min定量滤纸过滤，准确移取10.0mL滤液并加人40.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。

(4)食醋:准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠，以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释至25.0mL，混匀，定量滤纸过滤。取10.0mL滤液加入10.0mL缓冲液，混匀，以玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。

2、净化

(1)大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂:将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL-3mL空气通过柱体。以10mL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

(2)酱油:将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL酱油样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6ml-/min流速缓慢通过免疫亲和柱。用10mL 0.1％的吐温—20/PBS清洗，再以10m1水清洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加人1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

(3)食醋：将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL食醋样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL-/min流速缓慢通过免疫亲和柱，用10mL 0.1％的吐温-20/PBS溶液清洗，再以10mL水清洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

3.高效液相色谱条件：流动相:甲醇-水(45+55)；流速:0.8mL/min；柱后衍生化系统：衍生溶液:0.05％碘溶液；衍生溶液流速:0.2mL/min；反应管温度:70℃；反应时间:1min。

采用该方法国标做实验一批检品实验成本约需160元，实验前处理耗时约1.5h完成一批检品，而且只是用等度洗脱没考虑色谱柱的冲洗。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于，提供一种检测成本低，检测时间短的食品中黄曲霉毒素的测定方法。

一种食品中黄曲霉毒素的测定方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

1)测试品提取净化