[发明专利]鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白及其ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白及其ELISA试剂盒，属于生物工程领域。本发明所述ELISA试剂盒由固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液组成，所述抗体捕获剂为鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；检测方法包括：固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色、检测并判定几步骤；本试剂盒特异性、敏感性及稳定性好；本检测方法操作简单。

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及一种鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白及其ELISA试剂盒。

背景技术

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种革兰氏阴性菌，归于黄杆菌科(Flavobacteriaceae)，是鸭疫里默氏杆菌病的病原体，能够引起鸭、鹅、火鸡和多种禽类的一种慢性或急性败血症状的接触性传染疾病，呈世界性分布，发病率和死亡率高，已成为目前严重危害养鸭业的主要传染病之一。该病的临床症状主要表现为精神沉郁，瘫地、缩颈、拉黄绿色稀便等症状；病变特征是引起宿主的纤维素性气囊炎、脑膜炎、心包炎、肝周炎、以及干酪性输卵管炎，并伴有不同程度的败血症，对养殖业的发展存在着巨大的威胁。

目前已建立的用于检测鸭疫里默氏杆菌血清抗体的方法有琼脂扩散试验、凝集试验、全菌破碎作包被抗原的ELISA试验、PCR检测等。这些方法在检测方面都存在诸多不足之处。如琼扩试验和凝集试验的灵敏度较低，特异性不高，只能检测个别血清；PCR检测虽然灵敏但是在实际的生产当中运用难度大，需要专业的仪器和人员；破碎全菌的ELISA方法虽然彰显了在ELISA检测方面的优势，但是作为包被抗原，在制备菌体抗原时细菌培养要求高且在菌体抗原成分复杂、特异性等方面存在不足。

OmpH属于孔蛋白，目前未见鸭疫里默氏杆菌OmpH研究和应用的相关研究报道。

发明内容

为克服现有技术中存在的缺点与不足，本发明的目的之一在于提供一种鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白，该蛋白能作为鸭疫里默氏杆菌抗体的捕获剂，为鸭疫里默氏杆菌的抗体检测提供了新思路。

本发明的目的之二在于提供一种基于鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白的ELISA试剂盒，可用于检测鸭疫里默氏杆菌的血清抗体，有着较高的敏感性、特异性和重复性。

本发明的目的之三在于提供一种鸭疫里默氏杆菌抗体的检测方法，该方法操作简单，适用于大规模应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

上述的鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白的DNA序列如SEQ ID NO:2所示。

一种基于鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液、终止液，所述抗体捕获剂为如SEQ ID NO:1所示的鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白。

进一步，所述抗体捕获剂为浓度≥8.0μg/mL的鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白。

进一步，所述酶标二抗为作400倍体积稀释的羊抗鸭IgG-HRP。

用所述的ELISA试剂盒检测鸭疫里默氏杆菌抗体的方法，所述方法还包括平行的阴性实验，具体为：

A、将鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白与固相支持物连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

B、将待检血清通过保温反应使所述稀释血清与步骤A所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

C、将所述酶标二抗与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；