[发明专利]鸭疫里默氏杆菌OmpH重组蛋白及其ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种基于鸭疫里默氏杆菌OmpH 重组蛋白的ELISA试剂盒，其特征在于：所述ELISA试剂盒包括固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液、终止液，

所述抗体捕获剂为鸭疫里默氏杆菌OmpH 重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示，所述重组蛋白的制备方法如下：取含重组质粒pET32a-OmpH 的表达宿主菌BL21(DE3)，接种于含Amp 的LB 液体培养基中，37℃振摇培养过夜，次日按1：50 转接种于含Amp 的LB液体培养基中，37℃培养至OD600 值为0.4 时，取其中4只试管，分别加入IPTG 至终浓度为1.2mmol/L 25℃诱导9h 后，将含有鸭疫里默氏杆菌OmpH 重组蛋白的表达产物经过收集菌体、超声波破碎、收集上清，镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组OmpH 重组蛋白；

所述重组质粒pET32a-OmpH由以下方法构建：限制性内切酶BamH Ⅰ和XhoⅠ分别双酶切pMD19-OmpH质粒和原核表达载体pET32a(+)，16℃连接过夜即可，pMD19-OmpH质粒由纯化的鸭疫里默氏杆菌OmpH 基因与pMD19-T连接，所述鸭疫里默氏杆菌OmpH 基因由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示序列为引物，鸭疫里默氏杆菌RA-CH-1 株基因组DNA为模板，经扩增而得；

所述抗体捕获剂为浓度≥8.0μg/mL 的鸭疫里默氏杆菌OmpH 重组蛋白；所述酶标二抗为作400 倍体积稀释的羊抗鸭IgG-HRP。

2.根据权利要求1所述的基于鸭疫里默氏杆菌OmpH 重组蛋白的ELISA 试剂盒，其特征在于：封闭液为1％ BSA。