[发明专利]一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法，具体涉及固态发酵产物的样品前处理及定量分析酚类化合物的方法，属于固态发酵产物分析技术领域。

背景技术

酚类化合物也称为芳香族化合物，酚类化合物是饮料酒的香味组成部分，对于酒的闻香、口味及稳定性等方面均具有重要的作用。挥发性酚类化合物在白酒中的含量极少，但呈香作用却很强，在几百万分之一甚至千万分之一就能使人感觉到强烈的香气。有些挥发性酚类物质被描述为“酚味”、“动物臭味”和“马厩味”等异味，有些挥发性酚类物质当其含量高于某个限值时，会使酒中产生腥异味，掩盖酒的香味。因此，控制饮料酒中酚类化合物的含量对于稳定产品质量和品质非常重要。

然后，对于白酒来说，白酒中的酚类物质基本上均在固态发酵过程中产生，为了进一步探索这些酚类物质的产生来源、形成机理、代谢途径等，进而从酿造工艺上调控挥发性酚类物质的含量，从而达到控制终产品中酚类化合物含量的目的，建立“一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法”显得尤其必要。

近年来，国内各白酒企业或高校科研院所对白酒中的挥发性酚类物质的测定方法进行了研究分析，但目前尚没有关于固态发酵过程产物，如大曲、酒醅、窖泥发酵过程等的酚类化合物的定量分析方法。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种检测固态发酵产物中10种酚类化合物的定量分析方法。

本发明解决技术问题，采用如下技术方案：

本发明定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法，其特点在于按如下步骤进行：首先对待测固态发酵产物进行超声萃取、离心取上清液置于顶空瓶中，并加入2,6-二甲基苯酚内标溶液，通过顶空固相微萃取方式吸附富集目标物，最后通过气相色谱-质谱联用技术对待测固态发酵产物中所含酚类化合物进行定性(以碎片的丰度比定性)、定量分析。其中所述酚类化合物包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、4-丙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、2,4-二叔丁基苯酚和2,6-二叔丁基苯酚。具体按如下步骤进行：

(1)超声萃取：称取5.0～10.0g待测固态发酵产物于25mL棕色具塞试管中，加入25mL体积浓度为10～15％的乙醇溶液，旋紧塞子，在避光密闭条件下充分振荡混匀后，超声萃取20～30min，然后采用低温离心方式分离收集上清液，离心温度5～10℃，离心转速8000～10000rpm，离心10～15min；

(2)顶空固相微萃取：取8～10mL所述上清液置于20mL顶空瓶中，加入10μL的2,6-二甲基苯酚内标溶液，立即密闭顶空瓶，轻轻摇匀，然后在50～55℃恒温预热3～5min后，将PA萃取头插入所述顶空瓶中，于50～55℃恒温萃取30～40min；

(3)气相色谱-质谱联用：在顶空固相微萃取结束后，将PA萃取头插入到联有质谱检测其的气相色谱进样口，230～250℃热解析3～5min；

气相色谱条件为：

色谱柱为DB-WAX毛细管柱60m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度230～250℃，质谱检测器温度230℃，载气He，流速0.8～1mL/min，不分流进样；

程序升温条件为初始柱温40℃，以4～5℃/min上升至180℃，保持2～4min,然后以5～6℃/min升温到230℃，保持5～15min；

质谱条件为：

气相色谱与质谱接口温度为230℃；

电离方式为电子轰击源EI；

监测方式为选择性离子扫描模式SIM，电离能量70eV；

溶剂延迟为20～25min；

(4)标准曲线的建立

a、配制单标储备液：称取各种酚类化合物标准品，分别用无水乙醇配制成1～2mg/L的单标储备液，采用棕色储液瓶于4℃冰箱中避光保存；

b、配制混合标准储备液：吸取各酚类化合物的单标储备液0.5mL混合，然后采用色谱纯无水乙醇定容至50mL棕色容量瓶，获得混合标准储备液，于4℃冰箱中避光保存；

c、配制混合标准使用液：分别吸取混合标准储备液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL至50mL棕色容量瓶中，加入乙醇，然后用超纯水定容，配制成乙醇体积浓度为10％～15％的标准系列溶液；