[发明专利]一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法

权利要求书

1.一种定量检测固态发酵产物中酚类化合物的方法，其特征在于按如下步骤进行：首先对待测固态发酵产物进行超声萃取、离心取上清液置于顶空瓶中，并加入2,6‐二甲基苯酚内标溶液，通过顶空固相微萃取方式吸附富集目标物，最后通过气相色谱-质谱联用技术对待测固态发酵产物中所含酚类化合物进行定性、定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酚类化合物包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、4-丙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、2,4-二叔丁基苯酚和2,6-二叔丁基苯酚。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于按如下步骤进行：

(1)超声萃取：称取5.0～10.0g待测固态发酵产物于25mL棕色具塞试管中，加入25mL体积浓度为10～15％的乙醇溶液，旋紧塞子，在避光密闭条件下充分振荡混匀后，超声萃取20～30min，然后采用低温离心方式分离收集上清液，离心温度5～10℃，离心转速8000～10000rpm，离心10～15min；

(2)顶空固相微萃取：取8～10mL所述上清液置于20mL顶空瓶中，加入10μL的2,6-二甲基苯酚内标溶液，立即密闭顶空瓶，轻轻摇匀，然后在50～55℃恒温预热3～5min后，将PA萃取头插入所述顶空瓶中，于50～55℃恒温萃取30～40min；

(3)气相色谱-质谱联用：在顶空固相微萃取结束后，将PA萃取头插入到联有质谱检测仪的气相色谱进样口，230～250℃热解析3～5min；

气相色谱条件为：

色谱柱为DB-WAX毛细管柱60m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度230～250℃，质谱检测器温度230℃，载气He，流速0.8～1mL/min，不分流进样；

程序升温条件为初始柱温40℃，以4～5℃/min上升至180℃，保持2～4min,然后以5～6℃/min升温到230℃，保持5～15min；

质谱条件为：

气相色谱与质谱接口温度为230℃；

电离方式为电子轰击源EI；

监测方式为选择性离子扫描模式SIM，电离能量70eV；

溶剂延迟为20～25min；

(4)标准曲线的建立

a、配制单标储备液：称取各种酚类化合物标准品，分别用无水乙醇配制成1～2mg/L的单标储备液，采用棕色储液瓶于4℃冰箱中避光保存；

b、配制混合标准储备液：吸取各酚类化合物的单标储备液0.5mL混合，然后采用色谱纯无水乙醇定容至50mL棕色容量瓶，获得混合标准储备液，于4℃冰箱中避光保存；

c、配制混合标准使用液：分别吸取混合标准储备液0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL至50mL棕色容量瓶中，加入乙醇，然后用超纯水定容，配制成乙醇体积浓度为10％～15％的标准系列溶液；

d、对各混合标准使用液按步骤(2)进行顶空固相微萃取，然后按照步骤(3)进行分析，以各酚类化合物标准品与内标物特征离子峰的峰面积之比为横坐标，以各酚类化合物标准品与内标物的浓度之比为纵坐标绘制标准曲线；

(5)待测固态发酵产物的测定：将待测固态发酵产物按步骤(1)进行超声萃取，按步骤(2)进行顶空固相微萃取，然后按照步骤(3)气相色谱-质谱联用进行定性定量分析，通过标准曲线计算固态发酵产物中酚类化合物含量。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述2,6-二甲基苯酚内标溶液是以内标物质2,6-二甲基苯酚溶于色谱纯无水乙醇中获得，所述2,6-二甲基苯酚内标溶液的溶度为70～90mg/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测固态发酵产物为大曲、酒醅或窖泥。