[发明专利]一种长春新碱的ELISA检测方法

说明书

本发明公开了一种长春新碱的ELISA检测方法，具体涉及长春新碱ELISA检测方法。本发明所述方法的步骤包括(1)长春新碱人工免疫原和包被抗原的制备；(2)长春新碱抗体的制备；(3)利用长春新碱抗体与包被抗原组合，建立ELISA检测方法。本发明的有益效果在于该检测方法具有特异性强、速度快、灵敏度高、样品处理简单的特点。本发明最低检测限达0.10ng/ml，线性范围为0.10‑51.20ng/ml，能够满足临床血浆药物浓度的需要。本发明与长春碱、长春地辛及长春瑞宾没有交叉反应。本发明用于监测服用长春新碱病人血浆中长春新碱的浓度，为临床医生调整给药方案提供参考依据，对提高长春新碱临床治疗的有效性、减少毒副作用有着及其重要的意义。

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体涉及长春新碱ELISA检测方法。

技术背景

长春新碱(Vincristine)是一种双吲哚型生物碱。分子式C46H56N4O10，结构式为：

是以长春碱(长春花中生物碱含量最高的一种化合物)为原料合成的医疗用药，分子量为824.96。长春新碱作为一种常见抗肿瘤药，其疗效比长春碱约高10倍，可用于治疗急性淋巴细胞性白血病，疗效较好，对其他急性白血病、何杰金氏病、淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤和乳腺癌也有疗效。在临床，特别是对造血器官的肿瘤比较有效。其药理机制是能与微管蛋白结合，使细胞分裂(有丝分裂)在中期停止的作用。另外，它对微管蛋白以外的蛋白质，如肌动蛋白及10nm细丝蛋白等也起作用。

然而，由于长春新碱具有较大的神经系统毒性和局部刺激性，限制了其在临床上的应用。研究发现，其临床的毒副作用表现为剂量依赖性的神经毒性，且剂量毒性曲线陡峭，因此，长春新碱具有治疗窗狭窄，且呈剂量依赖性的特点。而且，在临床应用中，多种药物能与长春新碱产生相互作用，影响长春新碱的作用和毒性，如：诱导P糖蛋白MDR3药物可产生药物耐受，降低长春新碱作用；三唑仑通过抑制肝药酶2YP2D6，抑制长春新碱代谢，增加毒性。为了能将药物剂量浓度控制在有效的治疗窗内，减少毒副作用，需要建立一种快速、灵敏检测长春新碱血药浓度的方法，对服用长春新碱的病人监测血浆中长春新碱的浓度，为临床医生调整给药方案提供参考依据，对提高长春新碱临床治疗的有效性、减少毒副作用有着及其重要的意义。

据文献报道，利用毛细管区带电泳和电化学方法结合测定了人体红血球细胞中硫酸长春新碱的动力吸收情况。迄今为止，测定长春新碱的方法有液相色谱法、电分析法、伏安法、毛细管电泳、紫外分光光度法。中国药典规定长春新碱注射液用高效液相色谱法。但是长春新碱在血液中得浓度较低，因此，要达到分析的要求，往往具有样品前处理复杂繁琐、仪器昂贵，以及分析速度慢等特点，不宜进行临床推广和大批样品的检测。

ELISA法(酶联免疫吸附法)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。该方法具有分析速度快、灵敏度高、样品处理简单等特点。

ELISA定量测定人血浆中长春新碱浓度的方法目前国内外尚无文献报道。

发明内容

发明目的

本发明的一个目的是克服现有长春新碱检测技术的不足，提供一种具有特异性强、分析速度快、灵敏度高、样品处理简单的人血浆中长春新碱检测方法。

技术方案