[发明专利]一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法

权利要求书

1.一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)鱿鱼肝脏预处理：将鱿鱼肝脏绞碎与水按质量比1:1～1:1.5混合，在35～50℃下加入6mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7～9，保温20～30min，然后升温至70～90℃，反应1～1.5h，加入占肝脏重量2～4％的氯化钠，盐析5～15min，以4000～10000r/min离心15～30min，去掉上层鱼油，得到粗制的鱿鱼肝脏蛋白；

(2)鱿鱼肝脏蛋白脱脂：将粗制的鱿鱼肝脏蛋白脱水后，按料液比1g:3mL加入正己烷和异丙醇的混合液洗涤2～3次，真空干燥得到脱脂鱿鱼肝脏蛋白；

(3)混合酶酶解：将脱脂鱿鱼肝脏蛋白配成质量分数为3～5％的水溶液，调节pH6.5～7.5，加入占脱脂鱿鱼肝脏蛋白质量1～6％的混合蛋白酶，在40～65℃的水浴锅中水解10～18h，所述的混合蛋白酶由复合蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成；

(4)酶灭活：酶解结束后，以100℃水浴加热10～20min，使酶失活；

(5)离心：失活的酶解液在4000～10000r/min条件下离心20～40min，取上清液，冷冻干燥，冻干的粉末即为鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽。

2.根据权利要求1所述的一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述步骤(2)中正己烷和异丙醇的体积比为4:3。

3.根据权利要求1所述的一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，复合蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量分数分别为35～40％、35～40％、20～30％。

4.根据权利要求1至3任一项所述的一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于，在所述步骤(5)失活的酶解液离心之前，采用保加利亚乳杆菌和瑞士乳杆菌混合菌对酶解液进行脱腥处理，处理条件为：接种量占酶解液质量3～8％，发酵温度为35～45℃，发酵时间为3～6h。

5.根据权利要求4所述的一种混合酶酶解制备鱿鱼肝脏蛋白ACE抑制肽的方法，其特征在于，所述保加利亚乳杆菌和瑞士乳杆菌的菌种质量比为1:0.5～1:1.5。