[发明专利]一种PD-1抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，包括固相载体、抗体捕获剂和标记抗体，所述抗体捕获剂为PD-1细胞膜外结构域的重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1。

2.根据权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，所述PD-1细胞膜外结构域的重组蛋白预包被在所述固相载体上。

3.根据权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，所述标记抗体为辣根过氧化物酶或链霉素标记的IgG抗体。

4.根据权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为酶标板。

5.根据权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括PD-1抗体标准品、阳性对照品和阴性对照品中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括包被缓冲液、洗涤缓冲液、样品稀释液、封闭液、显色液和终止液中的一种或多种。

7.权利要求1至6任一所述的PD-1抗体检测试剂盒在PD-1抗体检测上的应用。

8.一种PD-1抗体检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的PD-1抗体检测试剂盒进行，所述PD-1抗体检测方法包括如下顺序进行的步骤：

1)将所述PD-1细胞膜外结构域的重组蛋白预包被在所述固相载体上，制得预包被固相载体；

2)向所述预包被固相载体中加入待测样本，孵育，随后洗涤；

3)向所述预包被固相载体中加入所述标记抗体，孵育，随后洗涤；

4)向所述预包被固相载体中加入显色液，孵育，随后加入终止液，并测定OD₄₅₀。

9.根据权利要求8所述的PD-1抗体检测方法，其特征在于，所述PD-1抗体检测试剂盒还包括PD-1抗体标准品，所述PD-1抗体检测方法还包括：

对所述PD-1抗体标准品进行梯度稀释，并采用步骤1)至步骤4)测定各梯度稀释液的OD₄₅₀，得到PD-1抗体标准品浓度与OD₄₅₀的线性关系；

根据所测定的待测样本的OD₄₅₀和所述线性关系，得到所述待测样本中PD-1抗体的浓度。

10.根据权利要求8或9所述的PD-1抗体检测方法，其特征在于，采用如下方法制备所述预包被固相载体：

采用包被缓冲液对所述PD-1细胞膜外结构域的重组蛋白进行稀释，控制稀释后的重组蛋白溶液的浓度不低于15.625ng/mL，将稀释后的重组蛋白溶液加入到所述固相载体上进行包被；

包被结束后，采用洗涤缓冲液对固相载体进行洗涤，随后向固相载体中加入封闭液进行封闭，封闭结束后洗涤并干燥，制得所述预包被固相载体。