[发明专利]一种从萹蓄中提取、纯化萹蓄苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从萹蓄中提取、纯化萹蓄苷的方法，属于生物技术领域。

背景技术

萹蓄苷，CAS号：572-30-5；分子式：C₂₀H₁₈O₁₁；分子量：434.35；性状：黄色针状晶体；熔点217℃；无水物熔点为222℃。萹蓄苷具有抗炎、抑菌、抗病毒作用，还具有抗氧化作用；结构式为：

萹蓄为蓼科一年生草本植物，生长于田野、路旁、荒地及河边等处，每年小暑时间采取茎叶，晒干作药用。主产于河南、四川、浙江、山东、吉林、河北等地。具有一定的药理作用。全草含萹蓄甙、槲皮甙、d-儿茶精、没食子酸、咖啡酸、草酸、硅酸、绿原酸、p-香豆酸、粘质、葡萄糖、果糖及蔗糖。硅酸的分布：叶1.6%，茎0.6%，根0.4%（如用作硅酸盐药物，可在其整个生长期采集，如用作黄酮药物，则宜于刚开花时采集）。

经现代研究证明，萹蓄具有的药理作用为：①利尿作用②降压作用③对子宫及止血作用④抗菌作用。

超临界流体结晶技术：超临界流体是指高于流体临界点，以单相形式存在的流体，其物理化学性质与非临界状态液体和气体有很大的不同。由于密度是溶解能力、粘度大小是流体的阻力、扩散系数是传质速率高低的主要参数，素以流体的特殊物理性质决定了超临界流体结晶技术的一系列重要特点。超临界流体的扩散系数比液体要大得多，粘度类似于气体，远小于液体，有比液体快得多的溶解溶质和携带能力，这对传质极为有利，缩短了相平衡所需的时间，是高效传质的理想介质。它具有不同寻常的巨大压缩性，通过简单的减压、升温即会引起流体密度的很大变化，从而使其中的溶质迅速地过饱和结晶析出，所以超临界流体是一种优良的结晶溶剂。而当在超临界流体中添加第二种、第三种有机溶剂后，还能在很大程度上使改性超临界流体结晶的选择性大大提高。而且，能够方便地通过条件的控制获取从亚微米级超细晶粒到常规大颗粒结晶，还可控制其粒度尺寸的分布。由于超临界流体是一种介于气相与液相之间的状态，物质结晶时避免了相的冲突，克服了表面张力的影响，固体微粒表面能不升高，因而生成的固体微粒不易发生聚集。超临界流体结晶技术具备操作简便、速度快、产率高、溶剂易彻底除去而无二次污染、少污染或不污染环境等优点。

目前，国内很少见萹蓄苷提取方法的相关专利报道。在现有公开专利“一种制备萹蓄苷的方法”（专利号 201010549755.9）中采用的工艺步骤为：包括将萹蓄药材粉碎，用6-10倍量30-40％低碳醇回流提取2-3次，每次1-2h，合并提取液减压回收醇，趁热加入大孔树脂柱中吸附，水洗无糖色，再用5-6BV30-60％低碳醇洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液加入水饱和正丁醇萃取2-3次，收集正丁醇层减压浓缩，加水回流趁热过滤，滤液调pH3-5放置结晶，再依次用低碳醇、丙酮回流溶解重结晶，干燥即得产品。该法溶剂使用量大，操作过程复杂，所得萹蓄苷纯度低。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种从萹蓄中提取、纯化萹蓄苷的方法，此法操作简单，所得产品纯度高。

为实现上述目的，一种从萹蓄中提取、纯化萹蓄苷的方法通过以下技术方案来实现：

1）材料预处理：取萹蓄经60~80℃干燥，粉碎，过40~80目筛；

2）酶解：称取一定量的粗粉，加入料液比为1：3~6的蒸馏水浸泡，并加入粗粉重量0.1%~0.3%的生物酶在pH值4~5，温度为45~50℃的条件下酶解1~3h；

3）微波提取：酶解结束，将所得酶解物在温度为70~80℃的条件下微波提取，滤渣重复提取2~3次，每次300~600s，过滤，收集滤液；

4）纯化：滤液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液通过超滤膜，收集透过液，将透过液上聚酰胺树脂柱，先用5%~10%、2~4倍柱体积的乙醇洗脱，再用50~70%、3~5倍柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液；

5）超临界流体结晶：将洗脱液通过溶液泵以高压状态急速喷入结晶釜内，流速为50~200ml/min，在结晶釜底部收集析出的萹蓄苷晶体。

步骤2）中所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种或两种以上的混合物。

步骤3）中所述微波的提取功率为800~1000W。

步骤4）中所述超滤膜可选用截留分子量为1000~5000的超滤膜。

步骤5）中所述结晶釜工作压力为10~20MPa，温度为30~40℃，结晶时间为30~100min。