[发明专利]一株高产洋橄榄叶素类化合物的菌株及该类化合物的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物药物领域，具体涉及一株高产洋橄榄叶素类化合物的菌株及该类化合物的制备方法与应用。

背景技术

红树林是位于海洋与陆地之间的特殊生态系统，近年来从该环境中分离到了很多放线菌新种和新型化合物，这使得红树林放线菌资源的研究越来越受到人们的重视。

洋橄榄叶素(elaiophylin)是一个具有C₂-对称性的十六元环大环双内酯抗生素，文献报道该化合物具有抗革兰氏阳性菌(包括MRSA、VRE等)和抗部分真菌的活性；增强雷帕霉素抗白色念珠菌的活性；抗寄生虫活性；抗肿瘤活性，能诱导细胞凋亡，抑制细胞周期等；用作免疫抑制剂，能抑制NO合成，产生抗炎作用；作为瘤胃动物增长促进剂；用作植物生长抑制剂及作为P-typease专一性抑制剂(K⁺依赖性ATP酶)用于研究ATPase的作用机制等。

迄今报道的洋橄榄叶素产生菌均为链霉菌，包括生孢链霉菌(S.melanosoprus)、吸水链霉菌(S.hygroscopicus)、白色链霉菌(S.albus)、紫黑链霉菌(S.violaceoniger)、假轮枝链霉菌(S.pseudoverticillus)、小小链霉菌(S.parvullus)等。目前，产量最高的发酵方法是以吸水链霉菌作为发酵菌种，最高发酵产量为2120mg/L。

发明内容

本发明的目的之一是提供三个新的洋橄榄叶素衍生物。

本发明的目的之二是提供一种高产洋橄榄叶素衍生物的链霉菌。

本发明的目的之三是提供一种利用所述链霉菌制备洋橄榄叶素衍生物的方法。

本发明的目的之四是提供洋橄榄叶素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种洋橄榄叶素衍生物，为2-甲基洋橄榄叶素、2-甲基-11,11'-O-二甲基洋橄榄叶素或13'-去2-脱氧岩藻糖-13'-O-甲基洋橄榄叶素。其中，2-甲基洋橄榄叶素为式Ⅰ所示化合物1，其分子式为C₅₅H₉₀O₁₈，分子量为1038.6；

2-甲基-11,11'-O-二甲基洋橄榄叶素为式Ⅱ所示化合物2，其分子式为C₅₇H₉₄O₁₈，分子量为1066.6；

13'-去2-脱氧岩藻糖-13'-O-甲基洋橄榄叶素为式Ⅲ所示化合物3，其分子式为C₄₉H₈₀O₁₅，分子量为908.6。

一种高产洋橄榄叶素衍生物的链霉菌，为保藏编号为CCTCC NO：M 2015276的链霉菌219807(Streptomyces sp.219807)。链霉菌219807从采自中国海南省三亚红树林的土壤样品中分离得到，经分类学研究和分子生物学研究鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.)，并保藏于中国典型培养物保藏中心(保藏编号：CCTCC NO：M 2015276；分类命名：链霉菌219807Streptomyces sp.219807；保藏日期：2015年05月04日；保藏地址：中国武汉、武汉大学)。该菌株的16S rRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述的链霉菌219807生产的洋橄榄叶素衍生物包括上述式Ⅰ-Ⅲ所示的化合物1-3和下述式Ⅳ所示的化合物4-7、式Ⅴ所示的化合物8：

化合物4-8分别为：洋橄榄叶素、11-O-甲基洋橄榄叶素、11,11'-O-二甲基洋橄榄叶素、14'-去乙基-14'-甲基洋橄榄叶素、11',12'-脱水洋橄榄叶素。

一种利用链霉菌219807制备所述洋橄榄叶素衍生物(化合物1-8)的方法，包括如下步骤：

(1)将链霉菌219807经平板活化后接种于ISP2液体培养基中培养，再转接到DO培养基中进行发酵；所述的DO培养基的配方为：葡萄糖10g/L，糊精25g/L，燕麦粉20g/L，棉籽饼粉10g/L，鱼粉5g/L，酵母提取物2g/L，CaCO₃ 3g/L，pH值为6.0。

(2)将步骤(1)获得的发酵液经固液分离后，菌丝体用丙酮超声破碎提取，减压浓缩至不含丙酮后，用乙酸乙酯萃取，浓缩得粗提物。