[发明专利]一种定点突变改造的基因工程酪氨酸酶

权利要求书

1.一种定点突变改造的基因工程酪氨酸酶，所述的基因工程酪氨酸酶的氨基酸序列为SEQ ID No.1。

2.权利要求1所述的定点突变改造的酪氨酸酶的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQID No.2所示。

3.一种宿主细胞，其含有如权利要求2所述的基因。

4.根据权利要求1所述的基因工程酪氨酸酶，其特征在于，将含有通过PoPMuSiC预测获得的氨基酸突变点的酪氨酸酶突变质粒转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)宿主中，构建突变体，进行序列验证确认，得到7位和234位两个酶稳定性及最适温度提高的突变体，分别为：Gln7Lys和Gly234Pro，以Gln7Lys突变质粒为模板，以携带Gly234Pro突变位点的寡聚核苷酸序列为引物，进一步的组合突变，获得组合突变Gln7Lys/Gly234Pro。

5.根据权利要求1所述的基因工程酪氨酸酶，其特征在于，第7位谷氨酰胺Gln突变为赖氨酸Lys，第234为甘氨酸Gly突变为脯氨酸Pro。

6.权利要求1所述的基因工程酪氨酸酶的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：以来自于能够甲基化的大肠杆菌宿主携带的酪氨酸酶基因的重组质粒为模板，以带有突变位点的寡聚核苷酸序列为引物，进行反向PCR，扩增突变质粒全长；使用DpnI限制性内切酶进行消化；取经过DpnI限制性内切酶处理的PCR产物热击转化E.coli DH5α，涂布于含有卡那霉素抗性的固体LB平板培养；挑起单菌落接入含有卡那霉素抗性的LB液体培养基，提取质粒，测序；将测序结果正确的质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞，获得突变体。

7.权利要求1所述基因工程酪氨酸酶的应用，其特征在于，所述的基因工程酪氨酸酶可用于黑色素的生产、化工生产和环境治理中。