[发明专利]一种用于检测大肠杆菌的引物及其方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于检测大肠杆菌的引物及其方法和应用，所述的引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，针对所涉及的引物，建立了大肠杆菌的检测方法，其具有特异性良好、灵敏较好、检测快速可靠、操作简单的特点，同时设计包含该引物的试剂盒，便于大肠杆菌的检测。本发明针对大肠杆菌的特异基因LafF设计特异引物，该引物可以快速、简便、准确的检测大肠杆菌。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测大肠杆菌的引物及其应用。

背景技术

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。大部分大肠杆菌是人及各种动物肠道中的正常寄居菌，食物或水中大肠杆菌的检出意味着直接或间接的近期粪便污染。大肠杆菌作为饮水、食品等的粪源性污染卫生细菌学指标；而且其在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近。它的出现也可能预示某些肠道病原菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)的存在。大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌,因此大肠杆菌的检测技术显得十分重要。

传统的大肠杆菌的检测方法有常规涂片镜检法、培养法等，但是这些方法存在一定的缺陷，如常规涂片镜检是最基本的细菌学检查方法，但是敏感性低，特异性差；培养法是目前临床上发现传染源的主要途径和手段，但一般需4到7天的时间，操作繁琐，费时耗力，不能实现快速的目的。

本发明利用生物信息学寻找出大肠杆菌特异基因，并针对其设计引物，建立了大肠杆菌的检测方法，实现了简便、快速、准确的检测出大肠杆菌的目的。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷，提出了一种用于检测大肠杆菌的基因，通过生物信息学手段获取该可用于鉴定大肠杆菌的特异基因，并针对该基因涉及引物。

本发明的另一目的在于针对所涉及的引物，建立了大肠杆菌的检测方法，其具有特异性良好、灵敏较好、检测快速可靠、操作简单的特点。

本发明的第三个目的在于提供一种检测大肠杆菌的试剂盒，便于大肠杆菌的检测。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种用于检测大肠杆菌的引物，包括上游引物和下游引物，所述的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述的下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

通过实验证明，本发明提供的检测引物对大肠杆菌具有良好的特异性，该检测引物针对的靶基因片段LafF基因。

一种检测大肠杆菌的方法，包括以下步骤：

1)提取待检测样品的模板DNA；

2)设计上述所述的引物；

3)PCR扩增：

反应体系：Taq 0.125μL,10×聚合酶缓冲液2.5μL,dNTP 2μL，Mg²⁺1.6μL，模板1μL，上下游引物各1μL，加ddH₂O补足25μL；

反应条件：95℃5min；95℃30s，57℃30s，72℃20s，30个循环；72℃1min；

4)利用琼脂糖凝胶电泳方法判断检测结果。

一种用于检测大肠杆菌的试剂盒，包括引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，具体为：10×聚合酶缓冲液2.5μL,dNTP 2μL，Mg²⁺1.6μL，模板1μL，上下游引物各1μL，ddH₂O 25μL。

本发明的有益效果为：针对大肠杆菌的特异基因LafF设计特异引物，该引物可以快速、简便、准确的检测大肠杆菌。

附图说明