[发明专利]一株具有抗甜瓜枯萎菌和抗甜瓜疫霉菌活性的植物乳杆菌AB-4及其应用

说明书

【技术领域】

本发明属于生物技术领域，特别涉及一株分离自蒙古国酸驼奶的植物乳杆菌菌株(Lactobacillus plantarum AB-4)，以及所述植物乳杆菌在发酵制品、生物农药或果蔬保鲜剂中的应用。

【技术背景】

植物的所有侵染性病害中，真菌性病害数量最为繁多，约占所有病害数量的70％以上。甜瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌甜瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Melonis)引起的病害，从苗期到生长发育期均可染病，常造成大片瓜田植株枯萎死亡，是危害甜瓜种植业的重要土传病害。目前，化学防治是控制甜瓜枯萎病的主要措施，但是长期使用化学农药会使病原菌产生抗药性，而且其化学残留和污染环境等弊端不符合现代社会所提倡的绿色无公害产品。

甜瓜疫霉病是由甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)感染甜瓜植株引起的真菌病害，甜瓜疫霉病是甜瓜生产上重要病害，一旦发病则难于控制。叶、茎和果实均可被侵染。同样地，化学防治是目前控制甜瓜疫霉病的主要措施。因此，现有技术中缺乏绿色、无公害的真菌病害防治方法。

乳酸菌的抑菌机理主要表现在以下五个方面：一是乳酸菌产生乙酸、丙酸、乳酸和苯乳酸等有机酸，使环境中的pH值显著降低且保持酸性，抑制不耐酸有害菌的生长繁殖；二是乳酸菌产生抗生素或细菌素的蛋白质或肽类物质，对有害菌有抑制或杀灭作用；三是乳酸菌产生的过氧化氢能激活过氧化氢酶—硫氰酸系统，抑制或杀灭有害菌；四是乳酸菌产生的二氧化碳可抑制部分霉菌和革兰氏阴性菌；五是乳酸菌通过拮抗作用与有害菌竞争营养物质，从而达到抑菌作用。

然而，现有的乳酸菌大多只对大肠杆菌等常见致病菌具有抑制作用。《来源于酸马奶的植物乳杆菌Bx6-2抑制甜瓜疫霉菌的研究》(《天津科技大学学报》25卷1期)公开了一株具有抗甜瓜疫霉活性的植物乳杆菌Bx6-2，并公开了其对甜瓜疫霉抑制率达58％。然而，并没有公开该菌株对于其他致病菌是否同样具有抑制活性。

【发明内容】

本发明的目的是克服现有技术缺陷，提供一株对多种病菌具有抑制活性的植物乳杆菌，能够应用于多种作物病害的防治中，实现绿色、无公害的真菌病害防治，即生物防治技术，具有无残留、无污染、成本低、兼防兼治、增产增收、保持生态平衡、能起到长效的效果。

为了实现上述目的，本发明提供一株具有抗菌活性的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AB-4，已于2014年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号为CGMCC No.9656。

本发明还提供上述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AB-4在抗甜瓜枯萎和甜瓜疫霉菌的应用。

本发明还提供上述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AB-4在农药和果蔬保鲜剂中的应用。

本发明还提供上述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AB-4在发酵制品中的应用。

以下将更详细地说明本发明的技术方案。

在本发明中，将用到以下培养基：

MRS琼脂培养基的组成是：大豆蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、Tweeen 801ml、磷酸二氢钠2g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺2g、硫酸锰0.02g、硫酸镁0.1g，蒸馏水1L，调节pH至6.2左右，琼脂15g，121℃、15min灭菌后倒到培养皿形成平板。

MRS液体培养基：大豆蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、Tweeen 801ml、磷酸二氢钠2g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺2g、硫酸锰0.02g、硫酸镁0.1g，蒸馏水1L，调节pH至6.2左右，121℃、15min灭菌。

M17培养基的组成是：胰蛋白胨5g、大豆蛋白胨5g、肉蛋白胨5g、酵母粉2.5g、抗坏血酸0.5g、硫酸镁0.25g、二钠甘油19g、琼脂11g、蒸馏水1L。

TPY增菌培养液的组成是：乳糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、酪蛋白胨10g、大豆蛋白胨5g、磷酸氢二钾2.5g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁0.1g、吐温800.25g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、蒸馏水1L，121℃、15min灭菌。