[发明专利]一种虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的检测方法

说明书

技术领域：

本发明属于医药领域，涉及一种中药制剂的检测方法，特别涉及一种虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的含量测定方法。

背景技术：

金水宝制剂(如金水宝胶囊)为已经上市的产品，由发酵虫草菌粉(Cs-4)填充而得，具有补益肺肾，秘精益气功能。用于肺肾两虚，精气不足，久咳虚喘，神疲乏力，不寐健忘，腰膝痠软，月经不调，阳痿早泄；慢性支气管炎、慢性肾功能不全、高脂血症、肝硬化见上述证候者。

甘露醇、核苷类、麦角甾醇、虫草多糖、氨基酸等被认为是发酵虫草菌粉的活性成分，因此，收载入中国药典的金水宝片、胶囊和百令胶囊，以及收载入卫生部药品标准的至灵胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊，均以腺苷或腺苷和甘露醇为含量测定的指标，缺乏各产品专属的指标成分。

最近，我们从Cs-4发酵菌丝体中发现了一种含量高、特征性强的化合物—马索亚内酯。有文献报道，马索亚内酯有良好的抗真菌、抗病毒、抑制肿瘤等药理活性，因此可能是金水宝胶囊中重要的活性成分，且该化合物在其他菌种的发酵虫草产品中未被检出或含量极低，作为定量测定的指标成分具有很强的专属性。

本发明建立了虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊中马索亚内酯的高效液相色谱测定法，该方法精确度高，操作简单，精密度，稳定性，重复性良好。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种新的虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊的检测方法。为此，本发明提供一种测定虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊中马索亚内酯的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明为采用高效液相色谱法对虫草菌粉(Cs-4)及其制剂金水宝胶囊中含有的马索亚内酯进行含量测定。所述方法包括以下步骤：

供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物，置于离心管中，加入甲醇溶液，密塞，超声提取，离心，将上清液转移至量瓶。残渣重复上述提取过程，合并上清液，以甲醇溶液定容。取适量，过0.45um微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液。

对照品溶液的制备:精密称取马索亚内酯对照品，置于量瓶中，以甲醇溶解并定容，得对照品溶液。

测定法:分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定得到色谱图，根据色谱图计算马索亚内酯的含量。

其中色谱条件如下:色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸水溶液为流动相，等度洗脱。

优选的，本发明的含量测定方法。包括以下步骤：

供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.1-2g，精密称定，置于10-50ml的离心管中，加入2-50ml 20-100％的甲醇溶液，密塞，超声提取5-60min，4500rmp/min下离心2-30min，将上清液转移至10-200ml量瓶。残渣重复上述提取过程两次，合并上清液，以20-100％的甲醇定容。取适量，过0.45um微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液。

对照品溶液的制备:精密称取0.001-0.1g马索亚内酯对照品，置于2-100ml量瓶中，以80％甲醇溶解并定容，得对照品储备液。分别吸取适量的对照品储备液，以20-100％甲醇稀释得到不同浓度的系列对照溶液，备用。

测定法:分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定得到色谱图，根据色谱图计算马索亚内酯的含量。

其中色谱条件如下:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为10-50cm，内径为2-8mm，粒径为2-10μm；以乙腈：0.01-0.5％磷酸水溶液(50:50)为流动相，等度洗脱；检测波长为200-260nm；流速为0.5-1.0ml/min；进样量为2-50ul；柱温为10-30℃。理论板数按马索亚内酯峰计算应不低于2000-6000。

最优选的，本发明的含量测定方法。包括以下步骤：

供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.5g，精密称定，置于50ml的离心管中，加入10ml 80％的甲醇溶液，密塞，超声提取10min，4500rmp/min下离心5min，将上清液转移至50ml量瓶。残渣重复上述提取过程两次，合并上清液，以80％的甲醇定容。取适量，过0.45um微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液。

对照品溶液的制备:精密称取0.01g马索亚内酯对照品，置于10ml量瓶中，以80％甲醇溶解并定容，得浓度为1000μg/mL的对照品储备液。分别吸取适量的对照品储备液，以80％甲醇稀释得到不同浓度的系列对照溶液，备用。