[发明专利]一种治疗退行性骨关节病的干细胞制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种治疗退行性骨关节病的干细胞制剂及其制备方法。

背景技术

退行性骨关节病又称骨关节炎、退行性关节炎、老年性关节炎、肥大性关节炎等，实际上其并非炎症，而是一种退行性病变，属于关节提前老化，特别是关节软骨的老化，由增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生。多见于中老年人群，好发于负重关节及活动量较多的关节(如颈椎、腰椎、膝关节、髋关节等)。过度负重或使用这些关节，均可促进退行性变化的发生。临床表现为缓慢发展的关节疼痛、压痛、僵硬、关节肿胀、活动受限和关节畸形等。

目前退行性骨关节病的主要治疗方法是减少关节的负重和过度的大幅度活动，以延缓病变的进程。例如肥胖患者应减轻体重，下肢关节病变患者可用拐杖或手杖等。理疗及适当的锻炼可保持关节的活动范围，对控制急性期症状有所帮助。对晚期病例，目前公认的消除疼痛、矫正畸形、改善功能的有效方法是在患者全身情况能耐受手术的条件下行人工关节置换术，可以大大提高患者的生活质量。

但是不管是理疗还是人工关节置换术，并不能从根本上修复损伤的关节软骨，退行性骨关节病患者将终生带病生存。体外实验显示间充质干细胞可以向软骨细胞分化，动物实验也提示间充质干细胞可以修复受损的关节软骨。有学者提出从健康成人骨髓中分离间充质干细胞并用于修复受损的关节软骨，但是抽取骨髓对人体有损伤，且抽取的骨髓量较少，有骨髓疾病时无法采集。各项研究显示，新生儿脐带中含有大量的间充质干细胞，其生物学特性与健康成人骨髓来源的间充质干细胞相似，并且具有易于分离培养、增殖能力强、低免疫原性等优点，其已成为生物医学工程领域的“明星细胞”。脐带是胎儿娩出后的附属产物，往往作为废弃物丢掉或烧毁。采集脐带过程很简单，且采集时对胎儿及产妇没有任何损伤。基于以上优点，我们认为脐带来源的间充质干细胞可以替代骨髓来源间充质干细胞用于治疗退行性骨关节病。

发明内容

基于上述原因，本发明为了克服现有技术的不足，通过长期的研究，确定了一种治疗退行性骨关节病的干细胞制剂及其制备方法：以健康新生儿的脐带为原料，原代分离培养并大规模扩增培养脐带间充质干细胞，利用扩增后的脐带间充质干细胞制备干细胞制剂，该制剂可直接用于临床治疗退行性骨关节病。

本发明是通过下述技术方案实现的。

一种治疗退行性骨关节病的干细胞制剂，以健康新生儿的脐带为原料，原代分离培养并大规模扩增培养脐带间充质干细胞，扩增后脐带间充质干细胞用人血白蛋白和二甲基亚砜的复方电解质注射液重悬，反复吸吹混匀后，将细胞逐渐降低保存温度冷冻成制剂。

优选地，上述治疗退行性骨关节病的干细胞制剂，所述扩增后脐带间充质干细胞通过7代扩增培养后制得。

优选地，所述治疗退行性骨关节病的干细胞制剂，所述扩增后脐带间充质干细胞用PBS重悬，反复吸吹混匀，再离心；离心结束后吸弃上清液；离心后扩增后脐带间充质干细胞用含有2～5％人血白蛋白和10％二甲基亚砜的复方电解质注射液重悬，反复吸吹混匀后，将细胞冻存盒置于普通冰箱保存30～60min，继续将细胞置于超低温冰箱(-80℃)保存过夜，最后将细胞置于液氮罐(-196℃)中长期保存。

一种治疗退行性骨关节病的干细胞制剂的制备方法，经过以下步骤：

采集脐带：取健康新生儿脐带，48小时内运输至实验室处理；

原代培养：将脐带灭菌消毒，去除脐静脉与脐动脉，撕取脐带华通氏胶，将华通氏胶置于离心管中；剪碎脐带华通氏胶，加入脐带间充质干细胞完全培养液，在细胞培养箱中培养；吸弃旧脐带间充质干细胞完全培养液及华通氏胶，浸洗贴壁细胞；加入Trypsin-EDTA消化贴壁细胞；加入含有2％FBS的PBS重悬细胞，反复吸吹混匀后离心；离心结束后吸弃上清液，沉淀细胞即为原代培养的脐带间充质干细胞(P0代)；