[发明专利]一种蛋白质固定试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测领域，具体涉及一种蛋白质固定试剂及其应用。

背景技术

硝酸纤维素膜(NC膜)是一种疏水的膜材料，由于这种材料固定蛋白质能力很强，目前这种膜材已经应用于免疫诊断试纸条的开发，但由于这种膜材是疏水的，诊断试剂厂家很难根据不同厂家的材质进行处理，并且处理操作非常麻烦、诊断试剂性能不一致，因此希望购买的NC膜经过亲水处理。所以现在市场上NC膜的生产厂家都推出经亲水处理的膜材提供给免疫诊断试剂厂家用于生产。

这种亲水的NC膜是通过在NC膜内添加大量的表面活性剂及亲水大分子物质来解决NC膜的亲水性问题。但是这种解决方法却严重影响了NC膜固定蛋白质的能力。因为蛋白质与NC膜的相互作用是一种非特异性吸附作用力，当这些表面活性剂、大分子物质封闭了硝酸纤维素固定蛋白质的非特异性吸附位点后，蛋白质就难以吸附，导致蛋白质固定不牢固。当NC膜固定的是超大分子的抗体时，抗体固定效果还比较稳定，当固定是一种比较小的蛋白质分子(如BSA、HAS等)时，这种蛋白质就非常不牢固，很容易随着层析液的流动而被冲走，从而导致诊断试条的测试结果非常不稳定。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种蛋白质固定试剂及其应用，使其能够提高NC膜上蛋白质固定效果，可以应用于NC膜免疫诊断试纸条的制备中。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种蛋白质固定试剂，包括阳离子表面活性剂和阳离子型高分子聚合物中的一种、缓冲液。

针对现有的NC膜固定蛋白质抗原效果不佳，致使免疫诊断结果不稳定的缺点，本发明提供了一种以阳离子表面活性剂或阳离子型高分子聚合物为主要成分的蛋白质固定试剂，其可以在制备NC膜免疫诊断试纸条中与相应蛋白质抗原一同作为试纸条上T(test)线划膜溶液，增强相应蛋白质抗原固定在NC膜上的效果，从而解决了检测不稳定的问题。其中，所述相应蛋白质抗原视检测和制备需求而确定，如为了制备尿微量白蛋白试纸条，相应蛋白抗原为人血清白蛋白，这种对应关系对于本领域技术人员是十分清楚的，相应蛋白质抗原的工作浓度一般为0.5mg/ml-5mg/ml，优选为1mg/ml-2mg/ml。

作为本发明的优选，所述阳离子表面活性剂质量百分含量为0.005％-0.1％，更优选为0.01％-0.05％，还可以从此范围中选择0.02％、0.03％或0.04％。

作为优选，所述阳离子型高分子聚合物质量百分含量为0.005％-0.1％，更优选为0.02％-0.05％，还可以从此范围中选择0.03％或0.04％。

作为优选，所述缓冲液的浓度为0.005-0.1mol/L。

作为优选，所述缓冲液为磷酸缓冲液，更优选为pH值7.4的磷酸缓冲液。

作为优选，所述阳离子型高分子聚合物选自瓜尔胶、聚丙烯酰胺。

作为优选，所述阳离子表面活性剂选自季铵盐类表面活性剂；更优选地，所述季铵盐类表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵或十二烷基三甲基溴化铵。

此外，为了更好地利于检测，本发明所述固定试剂还包括蛋白质保护剂，所述蛋白质保护剂选自蔗糖、海藻糖、麦芽糖等糖类物质，质量百分含量为0.5％-10％。

与直接用相应蛋白质抗原划膜溶液制备的NC膜免疫诊断试纸条相比，加入了本发明所述固定试剂制备而成试纸条，其T(test)/C(control)面积比更大，说明T线固定的蛋白质抗原越牢固，跟流经T线的样本作用才越强烈，从而才使T/C面积比更大。同时，利用本发明固定试剂制备的试纸条进行多次检测，其CV相比对照更好，结果更稳定。

基于此，本发明提供了本发明任意所述固定试剂在制备NC膜免疫诊断试纸条中的应用。

同时，本发明还提供了一种NC膜免疫诊断试纸条的制备方法，用缓冲液稀释蛋白质抗原，然后加入阳离子表面活性剂或阳离子型高分子聚合物，以此混合溶液作为T线划膜溶液划膜，同时进行C线化膜，划膜完后的NC膜在烘箱中过夜烤干，获得所述NC膜免疫诊断试纸条。

其中，所述缓冲液为磷酸缓冲液，更优选为pH值7.0-7.4的磷酸缓冲液。

作为优选，所述缓冲液的浓度为0.005-0.1mol/L。

所述稀释蛋白质抗原为稀释蛋白质抗原终浓度至0.5mg/ml-5mg/ml，更优选为1mg/ml-2mg/ml。