[发明专利]一种生长抑制素超表达DNA疫苗及构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种生长抑制素超表达DNA疫苗及构建方法和应用，将质粒pEGS/2SS用XhoⅠ和EcoRⅠ两个内切酶进行消化，得到含卡那霉素的两端有XhoⅠ和EcoRⅠ两个内切酶位点的pEGS/2SS片段，然后将合成好的tpa与pEGS/2SS片段连接反应，得到质粒pEGS/2SS‑tpa。将质粒pEGS/2SS‑tpa转化大肠杆菌感受态细胞DH5a中获得了大肠杆菌Escherichia coli DH5α(pEGS/2SS‑tpa)，保藏编号：CCTCC NO:M2015105。将质粒pEGS/2SS‑tpa作为DNA疫苗免疫小鼠，可促进小鼠生长、繁殖和泌乳，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及动物DNA疫苗的构建及应用，特别是涉及一种生长抑制素超表达DNA疫苗及构建方法和应用。

技术背景

生长抑素(Somatostatin,SS)基因疫苗，就是通过将编码生长抑素-14的基因克隆在真核表达载体上构建出的一个重组质粒。然后把该质粒导入动物体内，使SS-14在活体内表达出有活性的多肽，通过免疫应答产生抗生长抑素的抗体以达到中和内源生长抑素的目的，从而促进动物生长和泌乳。显然，在这种方法中发挥主要作用的是生长抑素。根据生长抑素“抑制垂体生长激素(growth hormone,GH)和催乳类激素释放”的作用，近年来国内关于SS基因免疫在动物繁殖方面的研究显示，SS基因免疫在促进动物生长和泌乳方面已初具成效，并取得较为明显的免疫效果。

众所周知，乳制品作为一种营养丰富、全面、消化吸收率高的优质液体食品，越来越受到广大消费者的喜爱，并受到普遍关注。鲜奶中含有丰富的蛋白质、糖类、氨基酸、维生素、矿物质和酶等，而奶类营养成分排序由高到低依此为水牛奶、羊奶、荷斯坦牛奶、人奶和马奶。这是因为，与普通牛奶相比，水牛奶的综合营养价值高出近2倍，酪蛋白含量高，胆固醇低，体细胞数低，干物质含量(17.5％)高0.5倍，不饱和脂肪酸含量高60-100倍，蛋白质含量(4％)高0.5倍，乳脂率7.5％，钙含量高0.3倍，锌含量高12倍，铁含量高78倍，维生素A含量高32倍(章纯熙2006)。因此，常饮水牛奶能促进更多的酪氨酸钙吸收，有助于骨骼和智力发育，降低心血管疾病发病率，提高人体免疫力。然而中国牛奶总产量仅占世界的6.4％，乳制品消费水平只是世界平均水平的1/5，同时水牛泌乳量、繁殖效率遗传力较低。上述现状的存在导致必然要对提高乳品质和泌乳性能展开研究。

生长抑素应用到动物泌乳是有例可循的。王艳玲等用SS的化学拮抗剂半胱胺(cysteamine hydrochloride,CSH)饲喂泌乳中期的荷斯坦奶牛，发现奶牛的日产奶量和饲料转化率都明显提高了(王艳玲等1999)。据Sun等报导，使用外源SS激素主动免疫泌乳母羊能显著提高其泌乳量(Sun et al.1990)。Imgap等在免疫大鼠时发现，只有主动免疫SS-14才能产生抗SS的抗体并且提高产奶量(Yi et al.1999)。肖慎华用“激生1号”(即一种SS重组痘苗病毒活载体疫苗)免疫奶牛，有促进泌乳的作用，并且使奶牛泌乳中后期的产奶量下降过程减慢，但乳品质未受影响(肖慎华2005)。以上研究结果表明，使用生长抑素基因疫苗来提高家畜的泌乳性能是可行的。