[发明专利]罗非鱼无乳链球菌GapA蛋白亚单位疫苗、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及罗非鱼无乳链球菌GapA蛋白亚单位疫苗、其制备方法及应用。

背景技术

无乳链球菌是链球菌属的一个种。1896年按照Lancefield氏血清学分类法把无乳链球菌归为B群链球菌，因为该群仅有无乳链球菌一种，因此无乳链球菌又称B群链球菌(GBS)。GBS是重要的人畜共患病的细菌性病原之一，能引起婴儿败血症、脑膜炎等，新生儿晚发性感染的死亡率可达2％～6％。GBS也是动物，包括牛、山羊和绵羊等的急、慢性乳腺炎的主要病原菌。Robinson等人于1966年第一次报道在淡水鱼金色美鳊(Notemigonus crysoleucas)中分离出B群链球菌。随后相继有包括罗非鱼在内的多种鱼类受无乳链球菌感染而大量死亡的报道。鱼类受链球菌感染后出现的典型症状之一是运动失控，组织切片显示链球菌可侵袭鱼类脑部神经系统。罗非鱼是世界性养殖鱼类，也是我国重要的淡水养殖鱼类，近年来链球菌病给罗非鱼养殖业造成极大的威胁。

在链球菌的免疫预防上，以色列的Eldar等人在1993年开发了虹鳟海豚链球菌(Streptococcus iniae)全菌灭活疫苗，从1995年到1997年，以色列的养殖虹鳟使用该疫苗进行免疫，每年大约免疫300万尾，使虹鳟因受海豚链球菌感染所致的死亡率由每年的50％下降至低于5％。但1997年以后，以色列养殖虹鳟暴发的海豚链球菌病，发病症状有别于以往，原疫苗对此病失去了保护效果。对从1997--2000年连续4年采集的样品进行血清学分析表明新菌株的血清型与早期的不同，且试验证实这两种血清型疫苗无交叉保护作用。由于针对某种血清型制备的灭活疫苗难以对所有血清型产生有效的保护作用，因此成功的无乳链球菌疫苗必须要包含各种血清型均保守的抗原区段。而无乳链球菌的荚膜免疫被证明保护力低下。

鉴于此，克服以上现有技术中的缺陷，提供一种新的无乳链球菌亚单位疫苗成为本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供了罗非鱼无乳链球菌GapA蛋白亚单位疫苗、其制备方法及应用。

本发明的目的可通过以下的技术措施来实现：

本发明提供了一种罗非鱼无乳链球菌GapA蛋白亚单位疫苗，包括：

（i）如SEQ ID No：1所示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段；和/或

（ii）能够编码如以SEQ ID No：1所示的氨基酸序列或其同源物或片段的核酸序列。

优选地，该疫苗还包括药物学上可接受的载体、稀释剂和/或佐剂。

优选地，该疫苗还包括弗氏佐剂，所述疫苗为如SEQ ID No：1所示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段与完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂中的一种或两种形成的混合乳化物。

优选地，所述的核酸序列如SEQ ID No：2所示。

本发明还提供了一种重组构建体，该重组构建体包含如SEQ ID No：2所示的核酸序列，所述核酸序列被可操作地连接于表达调控区域。

本发明还一种用于制备如SEQ ID No：2所示的GapA蛋白的编码基因的试剂，该试剂包括核苷酸序列如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物。

本发明还提供了一种制备上述的疫苗的方法，其包括如下步骤：

（a）使用上述的试剂扩增得到GapA蛋白的编码基因SEQ ID No：2；

（b）获得含有GapA蛋白的编码基因SEQ ID No：2的重组构建体；

（c）用所得重组构建体转化宿主细胞；

（d）将转化后的宿主细胞置于足以表达所述GapA蛋白的编码基因的条件下进行培养；

（e）GapA蛋白的分离纯化。

本发明另外还提供了如SEQ ID No：1所示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段在制备用于预防和/或治疗罗非鱼链球菌病药物中的用途。

本发明的有益效果在于，本发明的疫苗具有良好的免疫原性、安全性高、使用方便。

附图说明

图1是实施例1中GapA基因PCR扩增结果图。

图2是实施例1中GapA基因重组质粒酶切鉴定结果图。

图3是实施例1中GapA蛋白的Western-blot结果图。

图4是应用例1的罗非鱼免疫后累计死亡率统计图。

图5是本发明的疫苗的制备过程的具体流程图。

具体实施方式