[发明专利]提高生产子囊霉素产量的基因工程菌株及构建方法有效
| 申请号： | 201510128637.3 | 申请日： | 2015-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN104762247B | 公开（公告）日： | 2018-02-13 |
| 发明（设计）人： | 闻建平;宋柯璟;齐海山 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/76;C12N15/31;C12R1/55 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所12201 | 代理人： | 王丽 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 生产 子囊 霉素 产量 基因工程 菌株 构建 方法 | ||
1.一种提高生产子囊霉素产量的基因工程菌株；其特征在于基因工程菌为吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus TD01，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC 10615。
2.权利要求1的基因工程菌株构建方法；其特征在于：以S.hygroscopicus var.ascomyceticus ATCC14891为出发菌株，过表达fkbN和frr串联基因，构建获得了高效生产子囊霉素工程菌株Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus TD01。
3.如权利要求2所述的方法，其特征是Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus TD01的构建步骤如下：
(1)设计fkbN基因的PCR引物和frr基因的简并引物；
(2)以吸水链霉菌的基因组DNA为模板，分别扩增fkbN和frr基因片段；
(3)建立连入frr和fkbN编码基因的克隆载体pUCNR；
(4)通过克隆载体pUCNR，建立连入frr和fkbN编码基因的过表达载体pIBNR，热激转化到ET12567大肠杆菌感受态细胞，在安普霉素、氯霉素、卡那霉素抗性平板上筛选阳性转化子，进行PCR和双酶切验证，建立导入外源frr和fkbN基因过表达载体的重组菌株；
(5)将导入过表达载体的大肠杆菌ET12567与吸水链霉菌受体菌株进行接合转移，
(6)筛选具有安普霉素抗性的工程菌Streptomyces hygroscopicus var.ascomyceticus TD01。
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