[发明专利]一种类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种类弹性蛋白多肽ELP与柯萨奇腺病毒受体CAR融合蛋白ELP-CAR，由ELP、间隔区和CAR-D1区组成；所述间隔区采用CAR蛋白两个胞外区之间的间隔序列。

2.权利要求1所述的类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白ELP-CAR的制备方法，其步骤如下：

(1)将CAR-D1结构域编码序列优化成大肠杆菌K12株偏爱密码子序列，克隆在pUC57质粒载体中；设计1对引物，正向引物引入EcoRI酶切位点和CAR-D1与D2结构域间隔序列，反向引物引入XbaI酶切位点；正向引物序列如SEQ ID NO.1所示；反向引物序列如SEQ ID NO.2所示；以含CAR-D1结构域序列的pUC57质粒为模板，用PCR扩增带有间隔序列的CAR-D1结构域序列，用限制酶EcoRI和XbaI消化后备用；用限制酶EcoRI和XbaI消化pET/EI-GFP载体,电泳分离后胶回收切除GFP序列的载体片段，与上述CAR-D1结构域序列连接，获得重组载体pET-ELP-CAR；

(2)将重组载体pET-ELP-CAR转化大肠杆菌，在低温条件下进行ELP-CAR融合蛋白诱导表达；

(3)氯化钠终浓度为1.5mol/L，孵育条件为26℃，离心条件为室温，离心沉淀ELP-CAR融合蛋白。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤(1)是：CAR-D1编码序列为人工优化的大肠杆菌偏爱密码子序列；用CAR蛋白两个胞外区之间的间隔序列作为CAR-D1与ELP之间的间隔区序列。

4.权利要求1所述的类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白ELP-CAR在重组腺病毒浓缩和纯化中的应用。

5.权利要求4所述的融合蛋白ELP-CAR在重组腺病毒浓缩和纯化中的应用，其具体方法如下：

(1)将120μg/ml ELP-CAR融合蛋白与重组腺病毒感染细胞裂解物或培养上清混合；

(2)氯化钠终浓度为1.5mol/L，孵育条件为26℃，离心条件为室温，离心沉淀重组腺病毒；

(3)用pH9.0缓冲液洗脱重组腺病毒；

(4)氯化钠终浓度为1.5mol/L，孵育条件为26℃，离心条件为室温，离心去除ELP-CAR融合蛋白。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤(2)是：沉淀的重组腺病毒直接用于动物体内外试验。