[发明专利]一种细胞增殖速率的测定方法及应用

权利要求书

1.一种细胞增殖速率的测定方法，其特征在于，是在培养细胞的不同时间点分别取样，利用秋水仙素对所取样品进行处理，处理后利用乙醇固定细胞，再利用流式细胞仪对固定细胞进行细胞周期检测，同时检测未经秋水仙素处理的空白对照组的细胞周期，计算细胞增殖速率，绘制细胞生长曲线，再利用细胞生长曲线确定待测细胞的增殖速率。

2.权利要求1所述方法，其特征在于，步骤如下：

1)在含5％CO₂培养箱中培养细胞，并在细胞生长的不同时间点取样；

2)利用秋水仙素对步骤1)取样的细胞进行处理，处理结束后静置备用，同时设置未经秋水仙素处理的空白对照组；

3)利用乙醇对步骤2)所得的处理样品及对照组样品进行固定处理，获得固定细胞；

4)利用流式细胞仪测定步骤3)所得的固定细胞的细胞周期，并计算细胞的增殖速率，绘制细胞生长曲线；

5)利用步骤4)所得的细胞生长曲线测定待测细胞的增殖速率。

3.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1)所述细胞为鹿茸间充质干细胞；所述不同时间点，是在细胞培养的12h、24h、36h、48h、60h和72h取样；所述取样，是用直径100mm的培养皿取10⁶个细胞。

4.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)所述秋水仙素处理，是利用终浓度80-120μg/ml的秋水仙素对细胞进行处理。

5.权利要求4所述方法，其特征在于，所述秋水仙素处理，是利用终浓度100μg/ml的秋水仙素对细胞进行处理。

6.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2)所述静置，静置的时间为6h。

7.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3)所述固定处理，是利用70％的乙醇固定细胞。

8.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤4)所述利用流式细胞仪测定细胞周期，固定好的细胞样品用PBS洗涤，PI染色后，用流式细胞仪分析G2/M期细胞比例。

9.权利要求2所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)在含有5％CO₂培养箱中培养鹿茸间充质干细胞，并在细胞生长的12h、24h、36h、48h、60h和72h取样；

2)利用终浓度100μg/ml的秋水仙素对步骤1)获得的细胞样品进行处理，处理后静置6h，同时设置未经秋水仙素处理的空白对照组；

3)利用70％的乙醇对步骤2)所得的处理样品及对照组样品进行固定处理，获得固定细胞；

4)测定步骤3)所得的固定细胞的细胞周期，并计算细胞的增殖速率，绘制细胞生长曲线；

5)利用步骤4)所得的细胞生长曲线测定待测细胞的增殖速率。

10.权利要求1-9所述任一方法，其特征在于，用于测定细胞的增殖速率和生长曲线。