[发明专利]基于荧光共振能量转移技术的Caspase-8活性检测荧光探针在审
| 申请号： | 201510088148.X | 申请日： | 2015-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN104592396A | 公开（公告）日： | 2015-05-06 |
| 发明（设计）人： | 华子春;陈典华 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/85;C12Q1/37;G01N15/14 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 徐蓓 |
| 地址： | 210093 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 荧光 共振 能量 转移 技术 caspase 活性 检测 探针 | ||
1.一种基于荧光共振能量转移技术的Caspase-8活性检测荧光探针，为EBFP2-C8-EGFP，其中，EBFP2和EGFP分别表示增强型蓝色荧光蛋白以及增强型绿色荧光蛋白，C8表示Caspase-8的蛋白酶识别切割位点。
2. 根据权利要求1所述的Caspase-8活性检测荧光探针，其中Caspase-8的蛋白酶识别切割位点C8的特征序列是IETDGGIETD。
3.根据权利要求1所述的Caspase-8活性检测荧光探针，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
4.含有权利要求1所述的Caspase-8活性检测荧光探针的真核表达载体。
5.权利要求4所述的含有Caspase-8活性检测荧光探针的真核表达载体的构建方法，该方法包括以下步骤：
（1）EBFP2基因片段的获得；
（2）将EBFP2基因片段连入真核表达载体；
（3）C8-EGFP片段的获得；
（4）C8-EGFP片段连入包含有EBFP2基因片段的真核表达载体。
6.权利要求1所述的Caspase-8活性检测荧光探针在细胞中Caspase-8活性检测中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，所述的细胞为MCF-7细胞。
8.一种应用权利要求4所述的含有Caspase-8活性检测荧光探针的真核表达载体检测细胞中Caspase-8活性的方法，包括将含有Caspase-8活性检测荧光探针的真核表达载体转染细胞，然后用流式细胞仪检测。
9.根据权利要求8所述的方法，所述的流式细胞仪检测中，激发通道为355nm氪离子激发通道以及488nm氩离子激发通道。
10.根据权利要求9所述的方法，所述的在355nm氪离子激发通道中，利用带通450/50 和530/30分别检测EBFP2荧光信号和EBFP2到EGFP的FRET信号，在488nm氩离子激发通道中用带通530/30检测EGFP荧光信号。
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