[发明专利]与黄瓜表皮毛发育基因Mict紧密连锁的分子标记

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术，特别涉及与黄瓜表皮毛发育基因Mict紧密连锁的分子标记。

技术背景

植物表皮毛(Trichome)是一种结构高度特化的生物学器官，由原表皮细胞发育而来，是从单细胞水平研究植物细胞分化，包括细胞命运、细胞周期、细胞极性、细胞形态建成等方面的理想模型。表皮毛广泛存在于绝大多数植物表面，分为单细胞或多细胞，有腺体或无腺体，有分枝或无分枝几类。表皮毛在植物的生长发育及对环境的适应等方面，包括生物或非生物的，起着重要的作用。如增加表皮层厚度以调节体温，减少蒸腾作用水分散失，降低机械损伤，减少紫外光伤害，保护植物免受昆虫、食草动物及病原菌的侵害，有助于花粉的收集和传播等。

黄瓜(Cucumis sativus L.)属木兰纲(Magnoliopsida)、葫芦科(Cucurbitaceae)、甜瓜属(Cucumis)，是一年蔓生草本植物，世界重要蔬菜作物之一，因其花性型多样，被作为花性型研究的模式植物。表皮毛广泛分布于黄瓜植株的茎、叶、卷须、花瓣、萼片、子房表面，黄瓜果实属瓠果，由子房和花托共同发育而成，果实表皮毛形态高度特化，通常被称作“果刺”。

曹辰兴于1997年在华北类型黄瓜地方品种“大青把”自交后代的群体中发现无毛类型的自然突变体，其表现为茎、叶、卷须、花瓣、萼片、子房表面均无表皮毛，该突变体为黄瓜表皮毛形成机理研究提供了理想的材料，也为黄瓜遗传育种提供了无刺亲本。外观光滑的黄瓜污染少，清洗方便，是无公害蔬菜的理想品种。无瘤少刺的黄瓜果肉农药残留量比有刺黄瓜低27％，果皮农药残留量低18％。

黄瓜表皮毛不同于拟南芥与棉花，是典型的多细胞无分枝表皮毛。目前对于植物表皮毛的研究主要集中于拟南芥的单细胞类型，对多细胞表皮毛的研究尚未深入，黄瓜表皮毛相关基因的图位克隆及调控机制研究也未见报道。黄瓜无毛突变体果实无果瘤，且生殖生长提前，雌花花萼肥大，说明黄瓜表皮毛基因还参与了果瘤的形成及其它发育过程。本发明对黄瓜表皮毛相关基因图位克隆的初步研究，不仅可以揭示植物多细胞表皮毛发育的分子机理，而且能为更多表皮毛相关基因的克隆和功能的研究奠定基础，并加快黄瓜品质育种进程。

图位克隆(Map-based cloning)，亦称定位克隆(Positional cloning)，可在基因产物未知的情况下，利用分离群体的遗传连锁分析或染色体的异常，将目的基因定位到染色体的一种具体位置，找到与其紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆基因。最常用的标记筛选方法是分离体分组混合分析法(Bulked segregant analysis，BSA)，该方法在一对具有目的基因表型差异的亲本所构建的分离群体中，根据目的基因的表型，分别选取一定数量的个体，构成两个亚群，将每个亚群中个体的DNA等量混合，形成两个相对性状的“基因池”(Gene pool)，然后用合适的分子标记对两个基因池进行分析，在两池间表现出多态性的分子标记与目的基因座位相连锁，再利用分离群体进一步检测所得分子标记与目的基因的连锁程度，从而确定其在已知分子图谱或染色体上的位置。由于构建基因池使用了特定的分离群体，且在分组时仅对目的基因表型进行选择，这样保证了其他性状的遗传背景基本相同，两个基因池之间理论上应主要在目的基因区段存在差异，排除了环境及人为因素的影响，使研究结果更为准确可靠。

发明内容

本发明的目的，就是为了提供两种与黄瓜表皮毛发育基因Mict紧密连锁的分子标记。

为了实现本发明的目的，本发明采用了以下技术方案：

一种与黄瓜表皮毛发育基因Mict紧密连锁的分子标记，命名为Flanking-SNP-01，由序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸片段和SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段组成，其中SEQ ID NO.1所示核苷酸片段与表皮毛发育基因Mict紧密连锁，SEQ ID NO.2所示核苷酸片段与无毛基因mict紧密连锁。

所述分子标记Flanking-SNP-01由SEQ ID NO.5所示上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物扩增得到。