[发明专利]一种人运动神经元基因拷贝数相对定量检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人运动神经元拷贝数相对定量检测方法，其特征在于：是采用四个PCR反应分别对SMN1基因第7和第8外显子、SMN2基因第7和第8外显子进行拷贝数相对定量检测，并采用第五PCR反应对SMN1第6和第3外显子上三个热点突变进行定性检测，其中：

（1）第一PCR反应，是针对SMN1基因第7外显子的相对定量检测PCR反应；采用如下引物与探针：

公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5、SMN1第7外显子上游引物PE7-1F、SMN1第7外显子下游引物PE7-1R、SMN1第7外显子检测探针PE7-1D、SMN2第7外显子封闭探针PE7-2A；

（2）第二PCR反应，是针对SMN1基因第8外显子的相对定量检测PCR反应，采用如下引物与探针：

公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5、SMN1第8外显子上游引物PE8-1F、SMN1第8外显子下游引物PE8-1R、SMN1第8外显子检测探针PE8-1D、SMN2第8外显子封闭探针PE8-2A；

（3）第三PCR反应，是针对SMN2基因第7外显子的相对定量检测PCR反应；采用如下引物与探针：

公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5、SMN2第7外显子上游引物PE7-2F、SMN2第7外显子下游引物PE7-2R、SMN2第7外显子检测探针PE7-2D、SMN1第7外显子封闭探针PE7-1A；

（4）第四PCR反应，是针对SMN2基因第8外显子的相对定量检测PCR反应；采用如下引物与探针：

公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5、SMN2第8外显子上游引物PE8-2F、SMN2第8外显子下游引物PE8-2R、SMN2第8外显子检测探针PE8-2D、SMN1第8外显子封闭探针PE8-1A；

（5）第五PCR反应，是针对SMN1第6外显子和第3外显子3个热点突变检测的反应，采用如下引物与探针：

公用上游引物P1、公用引物P2、RPP40上游引物P3、RPP40下游引物P4、RPP40检测探针P5、SMN1第6外显子Y272C上游引物P272-F、SMN1第6外显子11bp-DUP上游引物P11-F、SMN1第6外显子下游引物PE6-R、SMN1第6外显子Y272C检测探针P272-D、SMN1第6外显子Y272C竞争探针P272-A、SMN1第6外显子11bp-DUP检测探针P11-D、SMN1第3外显子4bp-DEL上游引物PE3-4F、SMN1第3外显子4bp-DEL下游引物PE3-4R、SMN1第3外显子4bp-DEL检测探针PE3-4D；

其中，引物与探针所对应的核苷酸序列与修饰特征如下表

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