[发明专利]一种将hpalXoo基因转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法在审
| 申请号： | 201510065645.8 | 申请日： | 2015-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN104762326A | 公开（公告）日： | 2015-07-08 |
| 发明（设计）人： | 缪卫国;汪惠;刘文波;政服丛 | 申请（专利权）人： | 海南大学 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87;C12N15/31;C12R1/01 |
| 代理公司： | 深圳市千纳专利代理有限公司 44218 | 代理人： | 徐庆莲 |
| 地址： | 570228 *** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hpalxoo 基因 转入 短短 芽孢 杆菌 hab 化学 转化 方法 | ||
1.一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将短短芽孢杆菌HAB-5在LB平板上活化，挑取单菌落接种于LB液体培养基中培养得短短芽孢杆菌HAB-5菌液；
(2)转接经步骤(1)培养的菌液到MD培养基中培养；
(3)离心后倒去上清液，剩余悬浮菌体即得HAB-5悬浮菌体溶液；
(4)HAB-5悬浮菌体溶液加入hpa1Xoo得混合菌液，200-250rpm振荡培养；
(5)加入混合菌液体积10倍的LB，200-250rpm振荡恢复培养；
(6)离心后除去上清液，即得含有hpa1Xoo基因的HAB-5。
2.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(1)培养条件为，27-29℃振荡160-180rpm培养12-16个小时。
3.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(2)培养条件为，27-29℃振荡160-180rpm培养3-5h。
4.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(2)中MD培养基每10mL中含有以下组分：10×PC缓冲液0.92mL，50％葡萄糖0.1mL(115℃灭菌30min)，5mg/mL-色氨酸0.1mL，2.2mg/mL柠檬酸铁铵0.005mL，0.5mol/L天门冬氨酸钾0.24mL，1mol/L硫酸镁0.03mL。
5.根据权利要求4所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述的10×PC缓冲液各组分的摩尔浓度为：磷酸二氢钾44mmol/L，磷酸氢二钾60mmol/L，柠檬酸三钠30mmol/L。
6.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(3)中离心条件为，8000-10000rpm，离心8-12min。
7.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(4)中hpa1xoo的加入量为每毫升悬浮菌体溶液加入0.5-0.8ug的hpa1xoo；振荡培养条件为温度27-29℃、培养2-3h。
8.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(5)中恢复培养过程中，控制温度27-29℃，培养培养时间为2-3h。
9.根据权利要求1所述的所述的一种将基因hpa1Xoo转入短短芽孢杆菌HAB-5的化学转化方法，其特征在于：所述步骤(6)离心条件为8000-10000rpm离心10-12min。
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