[发明专利]一种高山被孢霉CCFM442菌株及其用途

说明书

【技术领域】

本发明属于动物饲料技术领域。更具体地，本发明涉及一种高山被孢霉CCFM442菌株，还涉及所述高山被孢霉CCFM442菌株的用途。

【背景技术】

多不饱和脂肪酸(PUFAs)可分为ω-6和ω-3等系列。ω-6系列PUFAs主要有亚油酸(LA)、γ-亚麻酸(GLA)、花生四烯酸(AA)等。AA是人体前列腺素合成的重要前体物质，它具有增加血管弹性和提高免疫力等生理功能，是重要的奶粉营养补充剂。ω-3系列PUFAs主要有α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)以及二十二碳六烯酸(DHA)。EPA能降低血液胆固醇水平以及动脉粥样硬化发生风险。DHA在提高婴幼儿智力等方面具有重要作用。WHO和FAO提出膳食中ω-6PUFAs和ω-3PUFAs的比例(以下简称ω-6/ω-3比)的最适值为(5-10)：1，在我国该比例严重失衡，达(10-30)：1。流行病学资料显示，饮食中ω-6/ω-3比过高与某些疾病的高发密切相关，如糖尿病、冠心病、乳腺癌等。因此，提高饮食中ω-3PUFAs比例并维持ω-6/ω-3比在适宜范围内具有重要意义。

ω-3系列PUFAs多来自于动物肝脏和鱼油等材料，因环境污染等因素，其生产受到限制。高山被孢霉(Mortierella alpina,M.alpina)是目前产PUFAs真菌中唯一经过正式安全性评估的菌种，其发酵生产ω-3PUFAs已被实验证实可行。利用M.alpina菌体制作菌饲料饲喂蛋鸡，可使鸡蛋中的ω-3PUFAs含量增加，这有助于提高饮食中ω-3PUFAs的比例。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种高山被孢霉CCFM442菌株。

本发明的另一个目的是提供所述高山被孢霉CCFM442菌株的用途。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种高山被孢霉Mortierella alpina CCFM442，该菌株已于2014年12月25日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No 10295。

高山被孢霉菌株CCFM442为对高山被孢霉野生型菌株进行遗传修饰后获得的工程菌株。具体遗传修饰方法以及所得菌株的生物学性质参见中国专利申请CN 201410087487.1的记载。所得的高山被孢霉具体培养条件如下：它先在温度28℃与转速为200r/min的条件下培养2天，然后在温度12℃与转速200r/min的条件下培养8天，高山被孢霉菌株CCFM442积累脂肪的规律较野生型菌株发生明显变化，其中EPA占总脂肪酸的比例明显增加，约为野生型菌株的7倍。正是由于这种性质的改变，为高山被孢霉菌株CCFM442成为相对高产ω-3PUFAs的工业菌株奠定了基础。

本发明还涉及所述的高山被孢霉CCFM442菌株在生产菌体饲料添加剂中的用途。

根据本发明的一种优选实施方式，生产本发明菌体饲料添加剂的步骤如下：

A、斜面培养

将冷冻保存的高山被孢霉CCFM442菌株挑取一环接种到PDA斜面培养基上，然后在温度25℃的条件下恒温培养14天，得到所述菌株活化培养物。

本发明使用的PDA斜面培养基是根据其常规配方配制的。PDA斜面培养基成分如下：200g马铃薯、20g葡萄糖、15g琼脂与1L自来水，使用氢氧化钠及氯化氢水溶液将其pH调节为6.0-6.2。

在这个步骤中，斜面培养所使用的设备是上海森信实验仪器有限公司销售的隔水式恒温培养箱(型号：GRP-9080)。

B、种子培养

将步骤A得到的活化培养物挑取一环接种到种子培养基中，在温度25℃与200rpm的条件下恒温振荡培养3天，再称得湿菌体重，将湿菌体与无菌水按照湿菌体与无菌水质量比1：4进行混合，接着用分散机对该混合体系进行分散10min以制备菌悬液，再按照每升所述菌悬液为10mL的接种量接种于所述种子培养基中，在温度25℃与转速200rpm的条件下恒温振荡培养36h，得到高山被孢霉CCFM442种子液。

本发明使用的种子培养基是根据下述配方配制的：20g/L葡萄糖、10g/L硝酸钾、3g/L磷酸二氢钾、5g/L酵母提取物与0.25g/L硫酸镁，自然pH。

在这个种子培养步骤中，使用的培养设备是上海知楚仪器有限公司销售的振荡培养箱(型号：ZQZY-70B)。