[发明专利]一种高山被孢霉CCFM442菌株及其用途

权利要求书

1.一种用高山被孢霉(Mortierella alpina)CCFM442生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于该生产方法的步骤如下：

A、斜面培养

将冷冻保存的高山被孢霉CCFM442菌株挑取一环接种到PDA斜面培养基上，然后在温度25℃的条件下恒温培养14天，得到所述菌株活化培养物；

B、种子培养

将步骤A得到的活化培养物挑取一环接种到种子培养基中，然后在温度25℃与200rpm的条件下恒温振荡培养3天，再称得湿菌体重，将湿菌体与无菌水按照湿菌体与无菌水的质量比1：4进行混合，接着用分散机对该混合体系进行分散10min以制备菌悬液，再按照每升所述菌悬液为10mL接种量接种于所述种子培养基中，在温度25℃与转速200rpm的条件下恒温振荡培养36h，得到高山被孢霉CCFM442种子液；

C、发酵培养

按照以发酵培养基体积计1％-5％接种量，将步骤B得到的高山被孢霉CCFM442种子液接种到发酵培养基中；首先在温度25℃的条件下培养2天，接着在温度6℃的条件下培养5天，得到含有高山被孢霉CCFM442的发酵液；

所述发酵培养基制备方法如下：制备含有50g/L葡萄糖碳源、20g/L豆粕、13.34g/L硝酸钾、3g/L磷酸氢二钾、1g/L硫酸钠、0.5g/L二水合氯化钙与0.5g/L六水合氯化镁的混合物水溶液，将其水溶液的pH调节至6.0，再在温度121℃下灭菌20min，得到所述的发酵培养基；

D、后处理

让步骤C得到的含有高山被孢霉CCFM442的发酵液进行离心分离，得到的湿菌体用蒸馏水进行洗涤，再离心分离，洗涤湿菌体接着干燥，于是得到一种干燥菌体，即所述的菌体饲料添加剂；

高山被孢霉(Mortierella alpina)CCFM442，该菌株已于2014年12月25日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.10295。

2.根据权利要求1所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在步骤C中，所述水溶液的pH是使用硫酸及氢氧化钾水溶液调节的。

3.根据权利要求1所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在步骤D中，所述的离心分离是在转速6000rpm的条件下进行离心分离10min。

4.根据权利要求1所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在步骤D中，所述的洗涤是使用以湿菌体体积计3-5倍蒸馏水洗涤2-4次。

5.根据权利要求1所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在步骤D中，所述的干燥是在温度48-52℃与风速2.1-2.5m/s是条件下干燥85-95min。

6.根据权利要求1所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在步骤D中，所述干燥菌体的含水率为以干燥菌体总重量计25.4-26.4％，总脂肪酸含量为7.6-10.7％，其中多不饱和脂肪酸在总脂肪酸中的含量是42.4-45.8％。

7.根据权利要求6所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于在所述的多不饱和脂肪酸中，ω-6系列多不饱和脂肪酸与ω-3系列多不饱和脂肪酸的比为4.5-5.3。

8.根据权利要求1-7中任一项权利要求所述的生产菌体饲料添加剂的方法，其特征在于所述菌体饲料添加剂的用量是基础饲料总重量的5-10％。