[发明专利]贯叶金丝桃丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种贯叶金丝桃丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。

背景技术

贯叶金丝桃为金丝桃科(Clusiaceae)，贯叶金丝桃(Hyperium perforatum)是我国的传统用药，其主要成分为金丝桃素、伪金丝桃素等具有抗抑郁、抗病毒、治疗创伤等多种作用。贯叶金丝桃浸膏制剂已经在德国上市，并已占德国抗中、轻度抑郁症药物市场的将近50%，许多国家也已将贯叶金丝桃制剂作为外用药和抗抑郁症的镇静药。

在高通量筛选的过程中，本发明意外地发现大叶贯叶金丝桃具有很好的抑制丁酰胆碱酯酶的活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种贯叶金丝桃提取物。

本发明还提供了以贯叶金丝桃提取物为主要活性成分的组合物。

本发明同时提供了贯叶金丝桃提取物及其组合物的制备和其在制备丁酰胆碱酯酶抑制活性的应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

维吾尔药贯叶金丝桃经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO₂）柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱（石油醚-丙酮，比例见表1），各石油醚-丙酮比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:3，体积比）洗脱，继用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:12，体积比）洗脱得到的石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:12，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:3，体积比）洗脱15倍柱体积，继用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:12，体积比）洗脱25倍柱体积，洗脱液为本发明丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该贯叶金丝桃丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层色谱（TLC）分析结果见图1， TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1，显色方法：香草醛-硫酸显色。

维吾尔药贯叶金丝桃经超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱（石油醚-丙酮，比例见表1），各石油醚-丙酮比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用石油醚-丙酮混合溶剂（石油醚-丙酮，100:100，体积比）洗脱，继用甲醇洗脱得到，甲醇洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。即，丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该贯叶金丝桃丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层色谱（TLC）分析结果见图2，TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1显色方法：香草醛-硫酸显色。

具体，发现过程如下：

1、贯叶金丝桃经甲醇超声提取物的制备

取维吾尔药贯叶金丝桃20 g，经超声提取，提取液浓缩后，得提取物SN0012AB，样品1.0015，留样0.0502g，上柱0.9513g，拌样硅胶1.4 g，空白硅胶5g，石油醚-丙酮系统。

2、石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果

取维吾尔药贯叶金丝桃20 g，经超声提取，提取液浓缩后，得提取物SN0012AB，1.0015 g，留样0.0502g，上柱0.9513g，丙酮溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶1.4 g，空白硅胶5 g，玻璃柱内径1.5cm，石油醚-丙酮系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积12.5 mL，每个梯度洗脱100mL，得到各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：丙酮梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图3和图4，TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮=6:1:1及石油醚：乙酸乙酯：丙酮=3:1:1显色方法：香草醛-硫酸显色。

表1

3、抑制丁酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果