[发明专利]聚合酶组合物、制得和使用其的方法有效
| 申请号： | 201480064864.8 | 申请日： | 2014-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN105765082B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | P·范德霍恩;D·梅热;T·尼基福罗夫;M·兰德斯;E·托泽 | 申请（专利权）人： | 生命技术公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6869;C12N9/12 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 李程达 |
| 地址： | 美国加*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚合 组合 使用 方法 | ||
1.组合物，其包含与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的分离的多肽，所述多肽具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、D423K和H281M，或具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、H281M、D264A、H273N和E493R，其中编号是相对于SEQ ID NO:2，并且其中所述多肽具有DNA聚合酶活性。
2.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
3.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有与SEQ ID NO:2具有至少97％同一性的氨基酸序列。
4.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有与SEQ ID NO:2具有至少99％同一性的氨基酸序列。
5.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
6.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有与SEQ ID NO:2具有至少96％同一性的氨基酸序列。
7.权利要求1的组合物，其中所述分离的多肽具有与SEQ ID NO:2具有至少98％同一性的氨基酸序列。
8.用于进行聚合的方法，包括：
(a)提供反应混合物，其包括与引物杂交并且结合到经修饰的多肽的核酸，其中所述经修饰的多肽包含具有与SEQID NO:2具有至少95％同一性的氨基酸序列并具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、D423K和H281M，或具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、H281M、D264A、H273N和E493R，并且其中多肽具有DNA聚合酶活性；以及
(b)使所述核酸与至少一种类型的核苷酸接触，其中所述接触包括将至少一个核苷酸掺入到所述引物上，从而产生延伸的引物产物。
9.权利要求8的方法，其中所述方法进一步包括检测反应混合物中延伸的引物产物的存在，从而判定是否已发生核苷酸掺入。
10.权利要求9的方法，其中所述接触和所述检测重复超过一次，从而检测多个核苷酸掺入。
11.权利要求10的方法，其中所述方法进一步包括鉴别多个核苷酸掺入中的至少一个。
12.权利要求8的方法，其中所述聚合方法包括PCR、qPCR、桥式PCR、RT-PCR、连接介导的PCR、等温扩增或乳液PCR。
13.一种用于从核酸模板获得序列信息的方法，其包括：
(a)提供反应混合物，其包括与测序引物杂交并且结合到经修饰的多肽的模板核酸，其中所述经修饰的多肽包含具有与SEQ ID NO:2具有至少95％同一性的氨基酸序列并具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、D423K和H281M，或具有氨基酸取代H46R、E446Q、H572R、N487R、H281M、D264A、H273N和E493R，并且其中多肽具有DNA聚合酶活性；
(b)使所述模板核酸与至少一种类型的核苷酸接触，其中所述接触包括使来自所述至少一种类型的核苷酸的一个或多个核苷酸掺入到所述测序引物的3'端上，并且产生延伸的引物产物；
(c)检测反应混合物中延伸的引物产物的存在，从而判定是否已发生核苷酸掺入；以及
(d)从所述至少一种类型的核苷酸鉴别所掺入的一个或多个核苷酸中的至少一个。
14.权利要求13的方法，其中所述接触、检测和鉴别步骤重复超过一次，从而鉴别多个连续核苷酸掺入。
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