[发明专利]多肽异源多聚体的制备方法

权利要求书

1.用于制备异源多聚体的方法，该方法包括下述步骤：

a)提供具有第1抗原结合活性、且包含Fc区的第1多肽的同聚体的步骤；

b)提供具有与该第1抗原结合活性不同的第2抗原结合活性、且包含Fc区的第2多肽的同聚体的步骤；

c)在可使铰链区内的半胱氨酸引起二硫键异构化的还原条件下，将该第1多肽的同聚体和该第2多肽的同聚体一起温育的步骤；以及

d)获得包含第1和第2多肽的异源多聚体的步骤，

在上述第1和/或第2多肽的Fc区所含的CH3区中，选自下述(1)～(3)所示的氨基酸残基组的1组～3组的氨基酸残基带有同种电荷，

(1)以EU编号表示的356位和439位的氨基酸残基；

(2)以EU编号表示的357位和370位的氨基酸残基；

(3)以EU编号表示的399位和409位的氨基酸残基，

在上述第1多肽的CH3区和上述第2多肽的CH3区的两方中，上述(1)～(3)所示的氨基酸残基组之中相同组的氨基酸残基分别带有同种电荷时，上述第2多肽的CH3区中的该组的氨基酸残基与上述第1多肽的CH3区中的该组的氨基酸残基带有相反电荷，

其中，第1和/或第2多肽中，改变以EU编号表示的397位的氨基酸，

其中以EU编号表示的397位的氨基酸为侧链体积大的氨基酸或侧链分支型的氨基酸，其中侧链体积大的氨基酸为Met(M)、Phe(F)、Tyr(Y)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Trp(W)、Arg(R)、His(H)、Glu(E)、Lys(K)、Gln(Q)、Asp(D)、Asn(N)、Cys(C)或Thr(T)，侧链分支型的氨基酸为Val(V)、Ile(I)或Leu(L)。

2.权利要求1所述的方法，其中，在权利要求1的步骤a)中，包含提供与第1多肽形成多聚体的第3多肽的步骤，且在步骤b)中，包含提供与第2多肽形成多聚体的第4多肽的步骤。

3.权利要求1或2所述的方法，其中，上述带有同种电荷的氨基酸残基选自以下的(A)或(B)中任一组所含的1个以上的氨基酸残基：

(A)谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)；

(B)赖氨酸(K)、精氨酸(R)、组氨酸(H)。

4.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和第2多肽中分别带有同种电荷的氨基酸残基组为以下的(1)～(4)中任意1组的氨基酸残基组：

(1)以EU编号表示的356位和439位的氨基酸残基；

(2)以EU编号表示的357位和370位的氨基酸残基；

(3)以EU编号表示的399位和409位的氨基酸残基；

(4)(i)以EU编号表示的399位和409位的氨基酸残基；以及

(ii)以EU编号表示的356位和439位的氨基酸残基。

5.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和第2多肽中分别带有同种电荷的氨基酸残基组为以下的组的氨基酸残基组：

(i)以EU编号表示的399位和409位的氨基酸残基；以及

(ii)以EU编号表示的356位和439位的氨基酸残基。

6.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和/或第2多肽中，改变氨基酸以使第1和/或第2多肽的CH3区的稳定性变为不稳定。

7.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和/或第2多肽的Fc区为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4型。

8.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和/或第2多肽的Fc区为来自小鼠的Fc区。

9.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和/或第2多肽中，

使以EU编号表示的397位改变为Met(M)、Phe(F)或Tyr(Y)。

10.权利要求1或2所述的方法，其中，第1和/或第2多肽中，还改变以EU编号表示的392位的氨基酸。