[发明专利]抗原受体的筛选测试

说明书

相关申请

本专利申请要求2013年9月30日提交的美国临时专利申请No. 61/884,348的优先权，该申请的内容以引用方式全文并入本文。

发明概述

本发明提供了用于识别特异性结合所关注的抗原的抗原受体(例如抗 体)的方法。本发明至少部分基于以下发现：抗原与表达抗原受体的细胞 (例如B细胞)表面上的同源抗原受体结合使得该细胞表面上的粘附分子 (例如整合素)被激活。这些激活的粘附分子可以容易地检测(例如使用 无标记测试系统)，因此起到识别表达抗原受体的细胞的作用，其中所述 的细胞包含特异性地结合所关注的抗体的抗原受体。本发明的方法特别用 于识别特异性地结合所关注的抗原的表达抗体的细胞(和其中表达的抗 体)。

因此，在一个方面中，本发明提供了用于识别特异性地结合所关注的 抗原的抗原受体的方法，该方法包括：将多个表达抗原受体的细胞与抗原 接触；在抗原存在和缺乏下，测量在表达抗原受体的细胞的表面上激活的 粘附分子的量；以及由多个表达抗原受体的细胞识别特异性地结合抗原的 表达抗原受体的细胞，其中在抗原存在下，在表达抗原受体的细胞的表面 上，激活的粘附分子的量增相对于合适的对照增多表明抗原与表达抗原受 体的细胞结合，由此识别特异性地结合所关注的抗原的抗原受体。

在某些实施方案中，所述的方法进一步包括无性分离所识别的表达抗 原受体的细胞。

在其他的实施方案中，所述的方法进一步包括测定所识别的抗原受体 的至少一部分的核酸或氨基酸序列。

在某些实施方案中，粘附分子为整合素。合适的整合素包括但不限于 白细胞功能抗原1(LFA-1)或VeryLate抗原4(VLA-4)分子。

在某些实施方案中，激活的粘附分子的量是通过测量表达抗原受体的 细胞与细胞外基质蛋白质的结合来测量的，其中所述的细胞外基质蛋白或 抗体与激活的粘附分子结合，但是不与静止粘附分子结合。合适的细胞外 基质蛋白质包括但不限于Inter-CellularAdhesionMolecule1(ICAM-1)或纤 连蛋白分子。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞与细胞外基质蛋白质或抗体 的结合是使用涂敷细胞外基质蛋白质或抗体的无标记生物传感器测量的。 在特定的实施方案中，生物传感器为比色共振反射生物传感器。

在某些实施方案中，抗原受体为B细胞受体(例如人类B细胞受体)。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞为B细胞(例如人类B细胞) 或杂交瘤细胞。在特定的实施方案中，B细胞是由一个或多个自然动物(例 如人类)分离的。在另一个特定的实施方案中，B细胞是由未使用所关注 的抗原进行免疫攻击的一种或多种动物(例如人类)分离的。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞(例如B细胞)被永生化。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞(例如B细胞)表达内源抗 原。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞(例如B细胞)表达异源抗 原的问题。在特定的实施方案中，所述的文库包含独特抗体(例如人类抗 体)的天然谱系(repertoire)。在另一个特定的实施方案中，所述的文库为 天然抗体文库。在另一个特定的实施方案中，所述的文库包含多个独特的 合成的抗原受体。

在某些实施方案中，表达抗原受体的细胞(例如B细胞)表达独特的 嵌合抗原受体的文库，其中各个嵌合受体包含与异源结合分子连接的抗原 受体(例如抗体)的一部分。

在另一个方面中，本发明提供了用于生产特异性地结合所关注的抗原 的抗原受体(例如抗体，例如人类抗体)的方法，该方法包括：根据上述 权利要求的任意一项所述的方法识别抗原受体；以及表达抗原受体或其抗 原结合部分。

在某些实施方案中，所述的方法进一步包括测定抗体的至少一个互补 性决定区(CDR)的核酸或氨基酸序列。在特定的实施方案中，所述的方 法进一步包括将至少一个CDR接枝到异源抗体的构架中。

附图简述

图1描绘了连接B细胞受体激活至整合素激活的“内-外”信号传递 途径的示意图。

图2描绘了无标记生物传感器测试的结果，其中所述的测试测量了响 应于B细胞受体的激活的、B细胞与细胞外基质蛋白质的结合。

发明详述