[发明专利]包含RAMP功能的通用蛋白质过表达标记及其应用

权利要求书

1.一种翻译速度调节用RAMP标记的制造方法，其包括：制作与宿主细胞相应的稀有密码子表的步骤；将目标基因的DNA序列转换为密码子的步骤；分析所述制作的稀有密码子表中的稀有密码子在目标基因ORF即开放读码框中出现的频率和位置的步骤；以及收集稀有密码子并进行配置的步骤，

其中所述RAMP标记选自序列号1至序列号42。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述稀有密码子的收集通过分析密码子的频率和同工受体tRNA基因数而实现。

3.根据权利要求2所述的方法，其中密码子的频率为0.5～3％，同工受体tRNA基因数为0～2个。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述稀有密码子的配置是按照在ORF中出现的顺序进行配置。

5.根据权利要求1所述的方法，其中在所述稀有密码子之间配置偏爱密码子。

6.根据权利要求1所述的方法，其中宿主细胞选自大肠菌、酵母、中国仓鼠卵巢细胞、人类细胞及植物细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其中宿主细胞选自大肠菌K-12、酿酒酵母、CHO-K1、HEK 293t及326-GFP。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，目标基因是编码不表达和难表达之蛋白质的基因。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，基因编码酯酶、β-葡萄糖苷酶、溶细胞素A即ClyA、重组抗体单链Fv即scFv、天冬酰胺酶B、四-细胞粘附分子即T-CAM、B3(Fv)PE38、氯霉素乙酰基转移酶即CAT、新普鲁兰酶、白细胞介素-1、白细胞介素-32、抗B淋巴细胞抗原CD20即抗-CD20抗体、和抗肿瘤坏死因子α即抗-TNFα。

10.一种翻译速度调节用RAMP标记，其利用权利要求1～8中任一项所述的制造方法来制造，其中所述RAMP标记选自序列号1至序列号42。

11.一种增加在宿主细胞中不表达和难表达之蛋白质的表达效率的方法，其包括：在宿主细胞中收集稀有密码子的步骤；构成针对目标基因的RAMP标记的步骤；制造包含RAMP标记和目标基因的表达载体的步骤；用表达载体对宿主细胞进行转化的步骤；将在适合表达蛋白质的培养基中转化的宿主细胞进行培养的步骤，

其中所述RAMP标记选自序列号1至序列号42。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述稀有密码子的收集通过分析密码子的频率和同工受体tRNA基因数而实现。

13.根据权利要求12所述的方法，其中密码子的频率为0.5～3％，同工受体tRNA基因数为0～2个。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述RAMP标记构成是按照稀有密码子在目标基因中出现的顺序来实现。

15.根据权利要求11所述的方法，其中在所述稀有密码子之间配置偏爱密码子。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述宿主细胞选自大肠菌K-12、酿酒酵母、CHO-K1、HEK 293t及326-GFP。

17.根据权利要求11所述的方法，其中目标基因是编码不表达和难表达之蛋白质的基因。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述基因编码酯酶、β-葡萄糖苷酶、溶细胞素A即ClyA、重组抗体单链Fv即scFv、天冬酰胺酶B、四-细胞粘附分子即T-CAM、B3(Fv)PE38、氯霉素乙酰转移酶即CAT、新普鲁兰酶、白细胞介素-1、白细胞介素-32、抗B淋巴细胞抗原CD20即抗-CD20抗体、抗肿瘤坏死因子α即抗-TNFα。

19.根据权利要求11所述的方法，其中RAMP标记配置成融合于目标基因的5'或3'，或者配置成导入到目标基因的内部，或者配置成独立地进行翻译。

20.根据权利要求11所述的方法，其中RAMP标记进一步与其它标记或融合蛋白质一起使用。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述其它标记为选自His标记、T7标记、S-标记、Flag-标记、HA-标记、V5表位、PelB及Xpress表位中的1种以上。