[发明专利]利用活性炭通过调整溶液条件来从蛋白混合物选择性地去除蛋白

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年2月26日提交的美国临时专利申请第61/769,269号的优先权，其整体援引加入本文。

技术领域

本发明涉及通过调整溶液条件利用活性炭从不期望的蛋白或蛋白杂质分离蛋白。

背景技术

活性炭以前已用于空气过滤器(参见例如，美国专利第6,413,303号)、气体净化(参见例如，美国专利第7,918,923号)、脱咖啡因(参见例如，美国专利第4,481,223号)、黄金提纯(参见例如，美国专利第5,019,162号)、燃料纯化(参见例如，美国公开第2006/0223705 A1号)、血液灌流(参见例如，美国专利第4,048,064号)、中毒和过量用药的治疗(参见例如，美国专利第4,453,929号)、污水处理(参见例如，美国专利第8,329,035号)、漏油清理(参见例如，美国专利第4,770,715号)、地下水修复(参见例如，美国专利第6,116,816号)、从汽车染料系统捕获挥发性有机化合物(参见例如，美国专利第7,044,112号)、化学纯化(参见例如，美国专利第4,906,445号)，蒸馏酒精饮料纯化(参见例如，美国公开第US 2007/0248730 A1号)、糖的脱色(参见例如，每个专利第2,082,425号)、口罩(参见例如，美国专利第5,714,126号)、防毒面具(参见例如，美国专利第4,992,084号)、防护防化服(参见例如，美国专利第7,877,819号)以及水净化过程(参见例如，美国专利第7,537,695号)。

此外，活性炭已用来从血清白蛋白去除小分子杂质如脂肪酸和胆红素(参见例如，Chen et al.,J.Biol.Chem.,242:173-181(1967)；Nakano et al.,Anal Biochem.,129:64-71(1983)；Nikolaev et al.,Int.J.Art.Org.,14:179-185(1991))。活性炭还已用来在植物病毒的纯化期间去除色素以及宿主蛋白、蛋白酶和核糖核酸酶(参见例如，Price,Am.J.Botany,33:45-54(1946)；Corbett,Virology,15:8-15(1961)；McLeana et al.,Virology,31:585-591(1967),美国公开第US 2006/0281075 A1号)。

此外，以前已描述活性炭可用于从质粒DNA去除低分子量质粒片段。参见，Kim et al.,J.Biosci.Bioeng.110:608-613(2010)。

发明内容

本发明至少部分是基于令人惊讶和出人意料的发现，活性炭可以用于利用接近待选择性地去除的蛋白的等电点的溶液条件从包含至少两种蛋白的混合物选择性地去除蛋白。

在一些实施方案中，提供一种从包含至少两种蛋白的样品选择性地去除蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)提供包含至少两种蛋白的样品；(b)调整所述样品的溶液pH，使得pH在待选择性地去除的蛋白的等电点的2.0pH单位内；(c)使所述样品与活性炭接触，其中所述活性炭结合待选择性地去除的蛋白；以及(d)从所述样品去除所述活性炭，由此从所述样品选择性地去除所述活性炭结合的蛋白。

在一些实施方案中，如本文所述，从样品选择性地去除蛋白的方法中使用的溶液pH在待选择性地去除的蛋白的等电点的1.0pH单位内。

在一些实施方案中，提供一种增加包含靶蛋白和至少一种不期望蛋白的样品中所关注的靶蛋白的纯度的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)提供包含所述靶蛋白和至少一种不期望蛋白的样品；(b)调整所述样品的溶液pH，使得所述pH在所述至少一种不期望蛋白的等电点的2.0pH单位内；(c)使所述样品与活性炭接触，其中所述活性炭结合至少一种不期望蛋白；以及(d)从所述样品去除结合所述至少一种不期望蛋白的活性炭，由此增加所述样品中所述靶蛋白的纯度。

在一些实施方案中，如本文所述，增加包含靶蛋白和至少一种不期望蛋白的样品中靶蛋白的纯度的方法中使用的溶液pH在所述不期望蛋白的等电点的1.0pH单位内。

在一些实施方案中，至少一种不期望的蛋白为蛋白杂质。

在一些实施方案中，所述靶蛋白为免疫球蛋白如抗体。在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在其他实施方案中，其为多克隆抗体。

在一些实施方案中，所述靶蛋白为非免疫球蛋白。