[发明专利]对从染色的FFPET切片显微切割的材料的RT‑qPCR分析

权利要求书

1.用于经福尔马林固定的、经石蜡包埋的组织切片的免疫组织化学染色的方法，其包括以下步骤：

a)提供固体支持物，

b)将所述经福尔马林固定的、经石蜡包埋的组织切片封固到所述固体支持物上，

c)自所述经福尔马林固定的、经石蜡包埋的组织切片除去石蜡，

d)于50至70℃加热所述固体支持物上封固的组织切片达12至24小时以修复表位，并

e)染色所述固体支持物上封固的所述组织切片，

其中至少步骤e)在存在0.5至3.0M氯化钠的情况中实施。

2.权利要求1的方法，其中用聚-L-赖氨酸包被所述固体支持物。

3.权利要求1的方法，其进一步包括以下步骤：

f)自所述固体支持物上封固的染色组织切片切出感兴趣区域，

g)自所述感兴趣区域分离RNA，

h)将分离的RNA逆转录成cDNA，

i)扩增和定量所述cDNA。

4.权利要求3的方法，其中用聚-L-赖氨酸包被所述固体支持物。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中氯化钠以1.5至2.5M的浓度存在。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中氯化钠以约2M的浓度存在。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中通过在二甲苯中温育所述固体支持物上封固的所述组织切片实施除去所述石蜡。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中于55至65℃实施加热所述固体支持物上封固的所述组织切片达14至18小时。

9.权利要求1-7中任一项的方法，其中于约60℃实施加热所述固体支持物上封固的所述组织切片达约16小时。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述染色包括使用经标记的抗体。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述固体支持物是膜载玻片。

12.权利要求3-11中任一项的方法，其中步骤f)包括显微切割或宏观切割感兴趣区域。

13.权利要求3-12中任一项的方法，其中所述感兴趣区域具有1-2mm²的大小。

14.权利要求3-13中任一项的方法，其中通过实时PCR实施扩增和定量cDNA的步骤。

15.一种用于实施根据权利要求1-14中任一项的方法的试剂盒，其中所述试剂盒包含：

a)用聚-赖氨酸包被的固体支持物，

b)用于表位修复的溶液，和

c)用于免疫组织化学染色的溶液，其包含0.5至3.0M浓度的氯化钠。

16.根据权利要求15的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含对于实施从RNA逆转录成cDNA、cDNA的扩增和定量必需的所有试剂。