[发明专利]末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置及末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于分离体液中的末梢循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell；以下也称为“CTC”)或稀少细胞的、具备特定的多孔性金属过滤器(以下也仅称为“CTC分离过滤器”)的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置(以下也仅称为“CTC分离装置”)。

本发明还涉及从体液中分离末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞的方法，其包括使用上述装置从癌症患者的血液等体液中分离CTC或稀少细胞。

背景技术

在癌症患者的血液中循环的肿瘤细胞或癌细胞被称为CTC。CTC被认为是转移癌的原因之一，暗示CTC检测可能对转移癌的早期诊断有效。但是，CTC为稀少细胞之一，在血中非常少，例如，每10⁸～10⁹个血细胞成分中约为1个，因此，提出了若干种CTC的分离方法。例如，分离方法中已知有：利用固定有抗EpCAM(上皮细胞粘附分子)抗体的磁性粒子或在柱状结构等的树脂表面上结合有捕捉抗体的微流体装置的方法；以及利用CTC与血细胞的尺寸的差异、使用过滤器进行分离的方法等(Isolation of rare circulating tumour cells in cancer patients by microchip technology.Sunitha Nagrath等Nature,2007,450:1235-1239)、(日本特开2011-163830号公报、日本特开2013-42689号公报、日本特开2005-10177号公报、日本特表2007-525642号公报、日本特开2009-106936号公报)。

在利用过滤器的CTC分离方法中，使用过滤器的材质由聚对二甲苯(parylene)(美国专利申请第20110111412A1号)、聚碳酸酯(F.Farace等,Br.J.Cancer,2011,105:847-853)等聚合物、硅、金属(日本特开2013-42689号公报)等构成且在其表面上具有多个7～10μm的孔的微过滤器。从原理上而言，过滤器具有使血液细胞通过而将CTC捕捉到过滤器 上的孔尺寸。

在日本特开2013-42689号公报记载的金属过滤器中，作为优选的金属，从金、银、铜、铝、钨、镍、铬、不锈钢或它们的合金中选择，另外，优选贯通孔的短边的长度为5.0～15.0μm，平均孔隙率为0.1～50％，过滤器的厚度为3～100μm。在其实施例中，使用镍过滤器(平均孔隙率：1.4％、孔的大小：8×30μm、孔的形状：圆角长方形)，回收掺入在血液中的人类小细胞肺癌细胞系。在该实验中，记载了癌细胞回收率为74.9±10.5％，残留白细胞数为697±84。

发明内容

发明所要解决的问题

上述的背景技术中所记载的、使用过滤器的尺寸选择性CTC浓缩装置与磁珠方式相比，具有简便、低成本等优点。但是，由于需要对作为样本的血液进行溶血的预处理、或者使用泵作为过滤的驱动力，因此，会对CTC造成细胞应激，或者，由于细胞的固定、流路的封闭性而难以进行活细胞的单细胞分离。

考虑到上述事实，本发明的目的在于实现存活的CTC或稀少细胞的高效回收，而且能够实现简便、轻柔的单活细胞分离。

用于解决问题的方法

本发明包含以下特征。

[1]一种末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置，其具备金属过滤器，所述金属过滤器具有能够捕捉体液中的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞的凹坑、和形成于该凹坑中且能够使所述末梢循环肿瘤细胞或所述稀少细胞以外的体液细胞通过的孔。

[2]如[1]所述的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置，其中，所述金属过滤器的材质为钯或钯镍合金。

[3]如[1]或[2]所述的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置，其中，所述凹坑的直径为20～30μm，所述凹坑的深度为5～15μm。

[4]如[1]～[3]中任一项所述的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装 置，其中，所述孔的直径为7～10μm。

[5]如[1]～[4]中任一项所述的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置，其中，所述凹坑和所述孔的孔密度为1×10⁴个/cm²～2×10⁵个/cm²。

[6]如[1]～[5]中任一项所述的末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置，其中，所述金属过滤器的厚度为10～40μm。