[发明专利]一株特异性拮抗黄单胞菌的变棕溶杆菌OH21的分离鉴定

说明书

(一)技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一株对植物病原黄单胞菌具有特异性拮抗活性的生防细菌菌株的分离鉴定。

(二)背景技术

黄单胞菌是一类重要的植物病原细菌，能侵染400多种植物，包括许多重要的农作物和经济作物，如水稻、棉花、大豆、十字花科植物、柑橘、香蕉和木薯等。其中水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pathovars)和地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis pathovars)在全球前十位最重要的植物病原细菌中分别排在第四位、第五位和第六位。

目前，生产上对黄单胞菌病害的防治主要依靠抗病品种和化学防治。化学防治所用的农药包括一些农用抗生素(如农用链霉素)、铜制剂(如络氨铜、喹啉铜)和一些保护性杀菌剂(如叶枯灵、叶枯净)等。总体来说，防治黄单胞菌病害的农药种类较少，而且这些农药有些使用受到限制，有些防治效果一般，因此，生产上迫切需要开发更多新型、高效、安全的农药品种。

溶杆菌(Lysobacter spp.)属于γ-变形菌门，黄单胞科，溶杆菌属。该细菌属的一些种能产生不同的小分子抗菌次生代谢物质，并具有高效抗菌活性和植物病害生防潜力，是一类新型植物病害生防细菌。因此，分离鉴定对黄单胞菌具有特异性拮抗活性的溶杆菌菌株，从中获得其合成的特异性抗菌活性物质，可为新型农用抗生素的开发和黄单胞菌病害的防治提供新的手断和途径。

(三)发明内容

本发明利用稀释涂布的方法，以野油菜黄单胞菌野油菜致病变种作为靶标菌，从植物根际土壤中筛选到一株对黄单胞菌具有特异性拮抗活性的菌株OH21，经形态学、16SrDNA等方法鉴定为变棕溶杆菌(Lysobacter brunescens)。该菌对黄单胞菌具有特异的拮抗活性。

本发明提供的拮抗细菌OH21，已于2013年12月27日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCC No.8650，分类 命名为变棕溶杆菌Lysobacter brunescens。

(四)附图说明

图1OH21在不同培养基上的菌落形态

图2OH21的电镜观察图片(OH21在电镜下菌体形态如图2所示)

图3OH21对黄单胞菌拮抗效果图(OH21对病原细菌的拮抗活性测定如图3所示)

图4OH21的16S rDNA PCR电泳图(OH21 16S rDNA序列PCR扩增的电泳图如图4所示)

图5OH21的系统发育树

(五)具体实施方式

以下通过具体实施对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

1材料和方法 

1.1试验菌株、培养基

试验菌株：野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)PXO99A菌株、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)RS105菌株、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)KACC菌株、地毯草黄单胞菌大豆致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.glycines)、丁香假单胞菌大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)；嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax citrulli)；丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)；梨火疫病菌(Erwinia amylovora)；大肠杆菌(E.coli)、抗生素溶杆菌(Lysobacter antibioticus)OH13(见专利CN 103667136 A)。

培养基：