[发明专利]一种γ -谷氨酰转肽酶与伴侣蛋白共表达重组质粒构建方法及应用在审
| 申请号： | 201410812443.0 | 申请日： | 2014-12-23 |
| 公开（公告）号： | CN104560849A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 殷志敏;王期;蒋毅;兰蕾 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210097 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 谷氨酰转 肽酶 伴侣 蛋白 表达 重组 质粒 构建 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种具有谷氨酰转肽酶酶活的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于：该基因工程菌是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌，宿主菌中共转化有伴侣蛋白表达质粒pG-Tf2与谷氨酰转肽酶表达质粒。
2.权利要求1所述大肠杆菌基因工程菌BL21/C4在生产茶氨酸中的应用。
3.一种利用谷氨酰转肽酶重组质粒生产茶氨酸的方法，其特征在于：是用伴侣蛋白表达质粒pG-Tf2与谷氨酰转肽酶表达质粒共转化大肠杆菌得到共转化子，诱导培养该共转化子；以经诱导培养的共转化子为酶源，谷氨酰胺和乙胺为转化底物，酶促合成茶氨酸。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的诱导培养条件如下：将共转化子菌液接入含有氨苄青霉素和氯霉素抗性液体TB培养基中，其中，TB培养基中加有10ng/ml四环素作为伴侣蛋白的诱导剂；振荡培养至OD600值为1.2后，加入终浓度为0.5mM的IPTG，20℃下诱导16h。
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