[发明专利]检测K-ras基因突变的探针、引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测K-ras基因突变的探针，其特征在于，所述探针是与K-ras基因第13位密码子的突变型序列特异性结合的Taqman MGB荧光探针，所述K-ras基因第13位密码子的突变型选自：AGC、CGC、TGC、GAC、GCC、GTC。

2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的探针。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述SEQ ID NO:2探针上标记的荧光与SEQ ID NO:3探针上标记的荧光不同。

4.一种检测K-ras基因突变的引物，其特征在于，所述引物用于扩增包含K-ras基因第13位密码子的核苷酸序列，该引物包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示序列的引物对。

5.一种检测K-ras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

与K-ras基因第13位密码子的突变型序列特异性结合的Taqman MGB荧光探针，所述K-ras基因第13位密码子的突变型选自：AGC、CGC、TGC、GAC、GCC、GTC；

用于扩增包含K-ras基因第13位密码子的核苷酸序列的引物对；

针对野生型K-ras基因第13位密码子GGC设计的PNA。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的探针；

SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物对；

SEQ ID NO:1所示序列的PNA。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：K-ras基因第13位密码子的野生型和突变型标准品。

8.一种检测K-ras基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

针对野生型的K-ras基因第13位密码子GGC设计PNA；

针对K-ras基因第13位密码子的AGC、CGC、TGC、GAC、GCC、GTC六种突变型设计TaqmanMGB荧光探针，并设计一对引物，该引物用于扩增包含K-ras基因第13位密码子的核苷酸序列；

利用所述PNA、Taqman MGB荧光探针、以及引物，对已知突变量的质粒标准品进行实时定量PCR检测，根据检测结果制出标准曲线；

对待测样本DNA进行实时定量PCR检测，根据标准曲线，以及Taqman MGB探针荧光的类别，判别K-ras基因第13位密码子的突变量和突变类型。

9.根据权利要求8所述的检测K-ras基因突变的方法，其特征在于，所述PNA如SEQ ID NO:1所示，所述Taqman MGB荧光探针包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的探针，所述引物包括SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示序列的引物对。

10.权利要求5所述检测K-ras基因突变的试剂盒在制备诊断肿瘤的产品中的应用。