[发明专利]防止云南野樱桃试管苗黄化的培养基及组织培养方法

权利要求书

1.一种防止云南野樱桃试管苗黄化的组织培养方法；其特征是：其步骤是：

无菌试管苗建立：选取当年生半木质化枝条，剪成一芽一段的芽段；经过杀菌消毒后，把芽段接种到芽启动培养基即MS + BA 0.3～1.5 mg/L + IBA 0.05～0.2mg/L + 蔗糖3% + 琼脂粉0.6% 的试管内；试管苗增殖：把无菌苗接种到增殖培养基即改良MS： MS3+ BA 0.1～1.0 mg/L + IBA 0.01～0.1 mg/L + 蔗糖3% + 琼脂粉0.6%上，进行增殖快繁；试管苗生根：把试管苗接种到生根培养基即1/4MS + IBA 0.5～2.0 mg/L + 蔗糖20～30 g/L上。

2.、根据权利要求1所述的基于云南野樱桃试管苗黄化的野樱桃组织培养方法；其特征是：其步骤是：

a、无菌试管苗建立：从生长健壮的野樱桃大树上，剪取当年生半木质化枝条，保存在湿度为80%～90%的容器中带回实验室，剪成一芽一段的芽段；用洗衣粉水对芽段进行清洗，而后用自来水流水冲洗30－60分钟，把材料拿到超净工作台上，放入无菌烧杯内，加入70%酒精杀菌30－45秒，倒出酒精，再加入0.1%的升汞（HgCL₂）杀菌6－10分钟，中间摇动3－5次，使外植体充分接触杀菌液；倒出升汞，加无菌水洗4－6次；取出外植体，用无菌吸水纸吸去外植体表面的水分，把芽段接种到装有芽启动培养基即MS + BA 0.3～1.5 mg/L + IBA 0.05～0.2mg/L + 蔗糖3% + 琼脂粉0.6%  的试管内，每管1个芽段；

b、试管苗增殖：在芽启动培养基上芽段萌发生长获得的绿苗即无菌苗，把无菌苗接种到增殖培养基即改良MS（MS3）+ BA 0.1～1.0 mg/L + IBA 0.01～0.1 mg/L +蔗糖3% + 琼脂粉0.6%上，进行增殖快繁；在灭菌前把培养基的pH值调至5.8，然后在121℃、一个大气压下进行高压灭菌20分钟；

c、试管苗生根：切取生长高度在1.5 cm以上的无菌试管绿苗，把试管苗接种到生根培养基即1/4 MS + IBA 0.5～2.0 mg/L + 蔗糖20～30 g/L + 琼脂粉0.6%上，进行生根培养，先使试管苗置连续暗培养7～14d，然后转到光/暗周期为16/8h条件下培养。

3.一种防止云南野樱桃试管苗黄化的培养基，其特征是：培养基设置为包含有芽启动培养基设置为包含有MS + BA 0.3～1.5 mg/L + IBA 0.05～0.2mg/L + 蔗糖3% + 琼脂粉0.6%、增殖培养基设置为包含有改良MS是指MS3+ BA 0.1～1.0 mg/L + IBA 0.01～0.1 mg/L + 蔗糖3% + 琼脂粉0.6%、生根培养基设置为包含有1/4MS + IBA 0.5～2.0 mg/L + 蔗糖20～30 g/L + 琼脂粉0.6%。