[发明专利]灯盏细辛中咖啡酸酯的提取工艺

权利要求书

1.一种灯盏细辛中咖啡酸酯的提取纯化方法，包括：

取灯盏细辛，加水或乙醇煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩成清膏；取清膏调节pH直至溶解，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pH 1～5，滤过，得滤液和沉淀；

取滤液，过聚酰胺柱，用水洗脱，弃去水洗脱液，再用20％-90％浓度乙醇梯度洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩成清膏，得到的清膏为咖啡酸酯。进一步纯化：将清膏用碱溶解后，用水溶解性≤80g/L有机溶剂萃取，去掉有机溶剂萃取部分，调节水溶液pH值至酸性(pH 1-5),用水溶解性≤80g/L的有机溶剂萃取,收集有机溶剂提取液，回收有机溶剂得到浸膏，即得咖啡酸酯。

2.如权利要求1所述的方法，其中，该方法为：

取灯盏细辛，加水或0％-95％的乙醇煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至75℃下相对密度为1.15-1.25的清膏；取清膏加水稀释，调节pH 7.5～9，滤过，滤液加硫酸或盐酸溶液调节pH 2～3，滤过，得滤液和沉淀；

取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，用至少2倍量的水洗脱，弃去水洗脱液，再用20％-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩成清膏，加氢氧化钠溶液，调节pH 7～10，用水溶解性≤80g/L有机溶剂萃取，取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2～3，用有机溶剂萃取，收集有机溶剂提取液，回收溶剂，得到的清膏为咖啡酸酯。

3.如权利要求2所述的方法，其中，该方法为：

取灯盏细辛以800g计，加水或0％-45％煎煮至少二次，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.25(75℃)的清膏。取清膏加3倍量水稀释，加5％氢氧化钠溶液调节pH 7.5～8.5，滤过，滤液加10％硫酸溶液调节pH 2～3，滤过，得滤液和沉淀；取滤液，通过聚酰胺柱，梯度洗脱，用至少2倍量的水洗脱，弃去水洗脱液，再用20％-90％乙醇洗脱，收集浓度为40％乙醇洗脱时的乙醇洗脱液以及70％乙醇洗脱的洗脱液，回收乙醇并浓缩至70℃下相对密度为1.10～1.20的清膏，加碱溶液，调节pH 7～10，用乙酸乙酯萃取至少1-3次，取碱水层用硫酸或盐酸溶液调节pH 2～3，用乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯提取液，减压回收乙酸乙酯溶液，剩余稠膏加水，煮沸，浓缩至45℃下相对密度为1.20～1.30的清膏，即为咖啡酸酯。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，该方法还包括，将得到的咖啡酸酯进行指纹图谱检测并计算含量，同时通过紫外法检测总咖啡酸酯含量；以液相法测定5个咖啡酸酯含量相对面积大于60％；紫外法测定咖啡酸酯的含量大于40％。

5.如权利要求4所述的方法，该方法中所述的高效液相色谱法为：取咖啡酸酯浸膏适量约0.03g,置小烧杯中，加5ml N,N-二甲基甲酰胺超声使溶解，滤过，取续滤液；精密吸取10ul，注入液相色谱仪；

在色谱柱为十八烷基硅烷为填料，采用梯度洗脱，流动相A为甲醇，流动相B为含0.5％的甲酸水溶液，C为乙腈溶液，梯度洗脱程序如下的色谱条件下，进行洗脱，

0分钟时，5％流动性A,92％流动相B,3％流动相C；

15分钟时，15％流动性A,73.5％流动相B,11.5％流动相C；

45分钟时，15％流动性A,73.5％流动相B,11.5％流动相C；

55分钟时0％流动性A,55％流动相B,45％流动相C；

65分钟时，0％流动性A,15％流动相B,85％流动相C；

65.1分钟时，5％流动性A,92％流动相3％流动相C；

80分钟时，5％流动性A,92％流动相B,3％流动相C；

在流速1.0mL/min；检测波长335nm；柱温30℃的检测条件下，得到该咖啡酸酯的指纹图谱，该指纹图谱上，上述组合物有效成分的保留时间如下，

3,4-O-二咖啡酰奎宁酸26-33min，

3,5-O-二咖啡酰奎宁酸28-35min，

飞蓬酯乙33-42min，

4,5-O-二咖啡酰奎宁酸40-50min，

灯盏细辛酯43-52min。