[发明专利]一种采用液相色谱法测定利伐沙班及其杂质的方法

权利要求书

1.一种采用液相色谱法测定利伐沙班及其杂质的方法，包括：

a）采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；

b）以缓冲溶液为流动相A，乙腈为流动相B；

c）流动相采用梯度洗脱方法，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，用紫外检测器进行检测；

其中，设置柱温为20℃至30℃，

所述十八烷基硅烷键合硅胶填料色谱柱选自Kromasil 100-5 C18柱，规格为：5μm，250×4.6mm和Agient Eclipse Plus C18柱，规格为：250×4.6mm，5μm，

所述缓冲溶液为三氟乙酸与磷酸盐的混合溶液，所述的缓冲溶液的pH为4.40-4.60，所述梯度洗脱方法为：0分钟，流动相A为95%～90%，流动相B为5%～10%；0分钟至9分钟，流动相A线性减少至70%～60%，流动相B线性增加至30%～40%；9分钟至28分钟，流动相A线性减少至60%～30%，流动相B线性增加至40%～70%；28分钟至50分钟，流动相A为40%～30%，流动相B为60%～70%；50.1分钟，流动相A为95%～90%，流动相B为5%～10%；50.1分钟至60分钟，流动相A为95%～90%，流动相B为5%～10%；即50分钟后为平衡色谱柱，流动相A和流动相B均为体积百分比，

所述杂质包含下列化合物中一种或多种：N- ({(5S)-2-氧代-3-[4-(3-氧代-4-吗啉基)-苯基] -1,3-噁唑烷-5-基}-甲基)-2-噻吩-甲酰胺、N,N’-双[{(5S)-2-氧代-3-[4-(3-氧代吗啉-4-基)苯基]-1,3-噁唑烷-5-基}甲基]脲、2-[2-({4-[(5S)-5-({[(5-氯-2-噻吩基)甲酰基]氨基}甲基)-2-氧代-1,3-噁唑烷-3-基]苯基}氨基)乙氧基]-乙酸或其单盐酸盐、5-氯-噻吩-2-羧酸、 N¹，N²-双({(5S)-2-氧代-3-[4-(3-氧代-4-吗啉基)苯基]-1,3-噁唑烷-5-基}甲基)-1,2-苯二酰胺。

2.根据权利要求1所述的方法，所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵和它们的混合物。

3.根据权利要求2所述的方法，所述磷酸盐为磷酸二氢钠。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，所述缓冲溶液中磷酸二氢钠的浓度为0.0001-1mol/L，三氟乙酸的浓度为0.01-0.1%V/V。

5.根据权利要求4所述的方法，所述磷酸二氢钠的浓度为0.01mol/L，所述三氟乙酸的浓度为0.05%V/V。

6.根据权利要求1所述的方法，还包含以下步骤：

d)供试品溶液的配制：取利伐沙班或含利伐沙班的制剂适量，加稀释剂溶解样品，并配制成每1ml含利伐沙班0.01至5mg的样品溶液作为供试品溶液；

e)对照溶液的配制：精密量取利伐沙班供试品溶液适量，加稀释剂制成浓度为供试品溶液浓度0.1%～2.0%的溶液，作为对照溶液；

f)设置流动相的流速为0.8～1.2ml/min，设置检测波长为220nm至250nm，设置色谱柱的柱温为20℃至30℃，设置进样量为5μl至100μl，分别精密量取等体积的供试品溶液与对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成供试品溶液有关物质的分离测定；

其中，所述稀释剂为甲醇、乙腈和水的混合溶液，甲醇：乙腈：水的体积比为1：1：1～2：2：1。

7.根据权利要求6所述的方法，步骤c)中，流动相的流速为1.0ml/min，检测波长为250nm，柱温为25℃，进样量为20μl。

8.根据权利要求6所述的方法，所述甲醇：乙腈：水的体积比为2：1：1。