[发明专利]核酸适体及其衍生物的用途及对组织冰冻切片的快速成像方法

说明书

本发明公开了一种核酸适体及其衍生物的用途及对组织冰冻切片的快速成像方法，其用途是在组织冰冻切片中检测特异性生物标志物。其方法是将组织冰冻切片用随机序列封闭非特异性结合，再用信号标记的核酸适体或者核酸适体衍生物进行孵育，观察组织冰冻切片的成像结果，根据信号在组织冰冻切片中的定位来判断病灶位置。本发明为疾病的诊断提供了一种新的有效的分子工具，其方法快速、便捷、廉价。

技术领域

本发明属于病理诊断方法，具体涉及一种核酸适体及其衍生物的用途及对组织冰冻切片的快速成像方法。

背景技术

疾病发生后组织细胞常常出现一系列的病理形态改变，表达出一些特异性生物标志物，通过鉴定组织病理形态学的改变可以对疾病进行诊断。细胞特异性生物标志物的发现有助于疾病的进一步确诊、指导治疗和预后的判断。临床病理形态学工作中最常用的为冰冻切片和石蜡切片。相较石蜡切片而言，冰冻切片制作步骤简单，更接近新鲜组织，最大限度的保存蛋白质的结构甚至功能，无需抗原复性。但目前临床上冰冻切片仅用于显微镜下快速病理形态学诊断。

指数富集的配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands byExponential Enrichment，SELEX）是近年发展起来的一项新的筛选技术，通过该技术可筛选到与靶标特异结合的小分子DNA/RNA物质称为核酸适体。由于其与抗体相比与靶标结合的特异性和亲和力相当甚至更强，并有可体外筛选、易于合成与标记、化学稳定性好、无免疫原性与生物毒性、靶分子范围广、分子量小、组织渗透力强、易于固定及化学修饰等优势，核酸适体作为一种新型分子探针用于疾病的诊断和治疗而备受关注。

以肿瘤性疾病为例，上皮细胞粘附分子 (Epithelial cell adhesion molecule，EpCAM)，在上皮来源的恶性肿瘤组织中表达增高，并与肿瘤的发生发展、转移及预后相关，因此，EpCAM可作为生物标记物在多种上皮来源恶性肿瘤的诊断和治疗中发挥作用。EpCAM的抗原表位包括胞内结构域（intracellular domain of epithelial cell adhesionmolecule,EpICD）及胞外结构域（extracellular domain of epithelial cell adhesionmolecule,EpEX）。目前临床上仅能通过EpCAM抗体对组织石蜡切片的免疫染色来定位EpCAM的组织分布，从而达到诊断和靶向治疗的目的。但抗体的生产成本高、耗时长，运输及储存不便，因此价格昂贵，并且需要分别针对其胞内和胞外的不同抗原表位选择anti-EpICD和anti-EpEX两种抗体。同时，临床常用的抗体-石蜡切片的免疫染色步骤繁琐。2011年，WeiDuan研究组筛选了EpCAM的RNA类型核酸适体1。但是RNA很容易被核酸酶降解，限制了它在临床研究的应用。随后，James Yang研究组使用SELEX技术成功筛选了一组EpCAM DNA类型的特异性核酸适体，其中一条最优化者命名为SYL3C 2。

再以肥胖为例，肥胖是现代社会亟待解决的流行病之一，与多种严重危害人类健康的常见病，如2型糖尿病、心脑血管疾病以及癌症等的发生发展密切相关。‌‌肥胖是由于白色脂肪组织在体内过度聚集所致，近年来针对作用于脂肪组织的药物开发防止肥胖的策略备受关注。2012年刘慧霞教授团队筛选得到针对白色脂肪组织成熟脂肪细胞的特异性核酸适体Adipo-83。

目前特异性生物标志物的检测主要依赖抗体对组织石蜡切片进行免疫组化实验，步骤繁琐，耗时长。目前还没有关于核酸适体及其衍生物用于组织冰冻切片特异性生物标志物的检测从而达到组织成像目的的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种操作简便、快速、廉价、有利于疾病快速诊断的核酸适体及其衍生物的用途及对组织冰冻切片的快速成像方法。

本发明的技术方案是这样实现的：