[发明专利]一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂盒，特别是涉及一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒。

背景技术

纤维蛋白溶解系统是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原、纤溶酶原激活剂、纤溶酶、纤溶酶抑制物。当纤维蛋白凝结块形成时，在纤溶酶原激活剂的存在下，纤溶酶原激活转化为纤溶酶，纤维蛋白溶解过程开始，纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段，形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由X-寡聚体、D-二聚体、中间片段及片段E(Fragment E)组成。其中，X-寡聚体和D-聚体均含D-二聚体单位。

人体纤溶系统，它对保持血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。D-二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程，而先产生凝血酶，后又有纤溶系活化；并且也反映在血栓形成的局部纤溶酶活性或浓度超过血浆2‰—抗纤溶酶活性或浓度。溶栓治疗是指用药物来活化纤维蛋白溶解系统。一般为投入一种纤溶酶原活化物如尿液酶、链激酶或组织型纤溶酶原活化物(tpA)，使大量纤溶酶生成，从而加速已形成血栓的溶解。FDP或D-二聚体生成，表明达到溶栓效果。

纤溶蛋白降解产物中，唯D-二聚体交联碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。因此，理论上，D-二聚体的定量检测可定量反映药物的溶栓效果、及可用于诊断、筛选新形成的血栓。因此，纤维D-二聚体是深静脉血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，弥漫性血管内凝血(DIC)的关键指标。临床上对D-二聚体含量的检测可用于以下疾病的诊断：脑血管疾病、肝脏疾病、外科手术患者、溶栓治疗的监测等。

D-二聚体的测定方法很多，有ELISA、TRIFMA、胶体金，胶乳增强免疫比浊法等。目前在临床上应用较为广泛的是胶体金法，ELISA操作要求严格，比较费时，胶体金作为定性或半定量方法，对于定量，稍有不足。而胶乳增强免疫比浊法有快速，定量和成本低的优势，越来越受到临床医生的关注。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种稳定性好，检测灵敏度高，线性范围广的的D二聚体检测试剂盒，以及D二聚体检测试剂盒的制备方法，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、促凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由缓冲液2、交联D二聚体单克隆抗体的聚苯乙烯胶乳微球、稳定剂2、保护剂2、防腐剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与D二聚体抗体之间以共价交联或物理吸附方式连接。

优选的，本发明中聚苯乙烯胶乳微球交联两种不同的D二聚体单克隆抗体。

本技术方案中的D二聚体胶乳增强免疫比浊试剂盒，将D二聚体抗体交联在聚苯乙烯胶乳微球表面，当血液中的D二聚体与D二聚体抗体反应时，带动聚苯乙烯胶乳微球聚集产生一定浊度，而浊度与血液中的D二聚体含量在一定范围成正比，可以用全自动生化仪在400-800nm波长下检测血液中D二聚体的含量。

优选的，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种，其pH为6.0～9.0，浓度为25～500mmol/L；所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。

本发明试剂R1中的缓冲液1可使用上述本领域各种常用的缓冲液，但为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明中所述试剂R1中缓冲液1优选为包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸的水溶液，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在缓冲液1中的浓度为：

所述缓冲液1的溶剂为水。

所述缓冲液1可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。