[发明专利]一种同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法

权利要求书

1.一种超高效液相色谱同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)桃金娘根药材鉴定；

(2)标准溶液的配置：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于100mL棕色容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含没食子酸10.00～150.0μg/mL和鞣花酸10.00～150.0μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用二甲基亚砜依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；

(3)样品前处理：将桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.1～1.0g桃金娘根粉末置于100ml具塞锥形瓶中，精密加入10～150mL甲醇，称定重量，按照50～1500W、25～100kHz和25～60℃的条件进行超声提取10～90min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干，二甲基亚砜溶解并定容至25ml容量瓶中，过0.19～0.45μm滤膜后供含量测试用；

(4)以步骤(2)所得的标准工作液为对照，将步骤(3)所得样品进行超高效液相色谱检测分析，色谱条件如下：

色谱柱：Waters BEH C18色谱柱；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：第0～2min使用6％乙腈；第2～3min使用6％～16％乙腈；第3～8min使用16％～20％乙腈；检测波长：第0～2min，检测波长为215～300nm；第2～8min，检测波长为220～385nm；流速：0.1～0.5ml/min；柱温：20～45℃；进样体积0.3～10μL。

2.根据权利要求1所述的超高效液相色谱同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法，其特征在于，还包括以下验证步骤：

方法线性范围、精密度和检出限计算：在步骤(4)所述的色谱条件下，分别精密吸取不同浓度的没食子酸和鞣花酸的混合对照品溶液注入液相色谱仪，以色谱峰峰面积(y)为纵坐标，以浓度(x)为横坐标，绘制标准曲线；对没食子酸和鞣花酸混合对照品溶液进行3～17次平行测定，计算没食子酸和鞣花酸峰面积和迁移时间的RSD，验证方法精密度；根据IUPAC规定，计算检出限。

3.根据权利要求1所述的超高效液相色谱同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法，其特征在于，还包括以下验证步骤：

稳定性试验：精密称取样品粉末，按步骤(3)样品前处理方法处理制备供试品，分别在制备后0、1、2、4、8、12和24h进样，测定峰面积；计算没食子酸和鞣花酸峰面积的相对标准偏差，验证样品在24h内是否稳定。

4.根据权利要求1所述的超高效液相色谱同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法，其特征在于，还包括以下验证步骤：

回收率试验：精密称取桃金娘根粉末样品9份，按步骤(3)样品前处理制备供试品方法制备供试品，分别向每一份供试品添加步骤(2)制备的含没食子酸和鞣花酸混合标准溶液，每个混合标准溶液浓度制备三份平行样品，并进样分析，计算回收率和相对标准偏差。